羟基红黄色素A对Lewis肺癌移植瘤微血管密度的影响.docVIP

精品论文 参考文献 羟基红黄色素A对Lewis肺癌移植瘤微血管密度的影响 高亭1 蒋引娣2 何小鹏1 张红英3（通讯作者） 谢军平4 　　（1.咸阳市中心医院呼吸与危重症医学科 712000） 　　（2.咸阳市中心医院血液内科 712000） 　　（3.陕西中医药大学第二附属医院 712000） 　　（4.南昌大学第二附属医院呼吸内科 330006） 　　【摘 要】目的：观察羟基红花黄色素A（hdroxysafflor yellow A,HSYA）对小鼠C57BL/6 Lewis肺癌移植瘤组织中微血管（MVD）表达影响。方法：C57BL/6近交系小鼠30只，造模后随机分为5组，每组6只，分别使用灭菌用水；环磷酰胺；HSYA高、中、低浓度组（1.4、0.7、0.35mg/kg）作用于小鼠模型，于造模第22天后处死所有小鼠，用CD31对肿瘤组织进行免疫组化染色，观察微血管生成情况。结果：HSYA中、低浓度组与CTX组微血管形成分别为22.63plusmn;3.82、18.46plusmn;2.81、13.56plusmn;2.96低于对照组34.82plusmn;3.94以及HSYA高浓度组32.32plusmn;2.76，差异具有统计学意义。结论：HSYA能够抑制Lewis肺癌移植瘤生长，与降低肿瘤微血管生成有关。 　　【中图分类号】R284.2 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）8-0707-02 　　肺癌作为当今世界发病率最高的肿瘤，其死亡率呈逐年上升的趋势。羟基红黄色素A（hydroxysafflor yellow A,HSYA）是红花发挥主要药理作用的成分之一。前期通过动物实验证明[1]低浓度HSYA能够抑制肺癌移植瘤中血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达，从而抑制肺癌移植瘤的生长。在此基础上本研究组通过进一步实验，观察HSYA对肿瘤组织中微血管密度的影响作用，进一步说明HSYA对肿瘤血管的抑制情况。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物及细胞株 C57/BL雄性小鼠30只，体重（20plusmn;2）g，购自陕西农林科技大学动物中心，饲养于咸阳市中心医院动物中心清洁级动物房；Lewis肺癌细胞株购自中国科学院上海实验动物中心。 　　1.2药物 HSYA标准品购自上海顺勃生物工程技术有限公司，纯度ge;98.4%;环磷酰胺（CTX）购自江苏恒瑞股份有限公司，200mg/支；CD31一抗：即用型，购自武汉博士德生物工程有限公司。 　　1.3实验方法 　　1.3.1 Lewis肺癌细胞培养 用含有10%胎牛血清及DMEM的培养基进行Lewis肺癌细胞培养，至于37.0℃、5%CO２　孵箱中进行培养，每２天更换１次培养基，并用0.25％胰蛋白酶消化后进行传代。 　　1.3.2 药物配制 CTX用灭菌注射用水配制成2g/L溶液；HSYA标准品，用灭菌用水配制成28mg/L、56mg/L、112mg/L溶液，并用0.22mu;m微孔滤膜滤过除菌，无菌分装后避光储存于-20℃冰箱中。 　　1.3.3动物造模 待Lewis肺癌细胞株传代足够数量后，取处于对数生长期细胞，用0.25%胰蛋白酶消化后在倒置显微镜下技术，观察活力＞95%，调整浓度至1times;107/mL细胞悬液，按0.2ml/只接种于C57/BL小鼠侧肋腹皮下，复制小鼠Lewis肺癌移植瘤模型。 　　1.3.4 动物分组及给药 在造模24h小时后，将所有所有小鼠采用计算机随机数字编排分为5组，每组6只；分别为灭菌用水组（对照组）；CTX组；HSYA高、中、低浓度组（1.4、0.7、0.35mg/kg）。在造模后第2天开始，对HSYA高、中、低浓度组腹腔注射药物（2d/次）；对照组给予腹腔注射灭菌注射用水（2次/d）；CTX组于造模后第2天按25mg/kg给予腹腔注射（1次/2d）。 　　1.4观察指标 　　肿瘤微血管密度(MVD)判断采用Weidner法进行计算[2]，先低倍镜下（times;100）下选取微血管最丰富的区域，避开肿瘤坏死区及出血区，然后在高倍镜（times;400）计算该区域视野的微血管数目，计数5个视野的微血管术，取平均值作为该肿瘤的MVD。 　　1.5统计学分析 采用SPSS 17.0软件进行数据分析，MVD采用ONE-WAY ANOVA检验。plt;0.05有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1HSYA对小鼠Lewis肺癌移植瘤MVD的影响 观察移植瘤组织切片，可见肿瘤微血管内皮细胞被染成黄棕色。HSYA中、低浓度组与CTX组微血管形成分别为22.63plusmn;3.82、18.46plusmn;2.81、13.