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M5 One Step Western Kit HRP (Mouse) 使用说明书 产品名称 单位 货号 M5 One Step Western Kit HRP (Mouse) 50T MF409-05 【储存条件】 2-8℃保存，避免冷冻 【产品组分】 Blocking Buffer 500 ml Antibody Pretreat Solution（HRP/Mouse） 5x1ml Dilution Buffer 500 ml Wash Buffer（10×） 500 ml 【产品简介】 一步法快速WB试剂盒（鼠）是Western Blot检测试剂盒，能够在1小时左右得到高质量的Western Blot结果，且操作简便、检测灵敏度高、背景低、不需再加入二抗、系统稳定性强。常规的Western Blot间接法检测过程（封闭、一抗结合和二抗结合）需要较长的时间，实验流程复杂且需要多步条件优化。胶上的蛋白转移到载体膜上后，使用试剂盒中的封闭液孵育5 min，再用抗体反应液处理后的一抗孵育载体膜，经洗涤三次（每次5 min）后，即可进行发光或显色检测。本试剂盒针对目的蛋白一抗为鼠来源的实验系统使用。 【注意事项】 1. 客户需自己准备鼠来源的一抗。 2. 使用Blocking Buffer封闭液、Antibody Pretreat Solution（HRP/Mouse）抗体反应液（鼠）、Wash Buffer（10×）漂洗液之前请充分混匀。 3. 漂洗液如在2-8℃保存时出现沉淀，请恢复到室温，把沉淀溶解后正常使用，1×漂洗液可在室温保存一个月。 4. 建议转膜完成后用丽春红等试剂染色，并把膜上多余部分剪去以增加试剂的使用效率。 5. 一抗和抗体反应液HRP（鼠）需要通过预实验来确定最佳的稀释用量。 6. 抗体反应液HRP（鼠）、抗体稀释液和抗体用量可根据膜的大小按比例放大或减少。 7. 加入一抗的抗体稀释液可以回收重复使用一次。特异性及亲和力低的抗体不建议重复使用。回收后抗体如在1-2天内使用放置在2-8℃，长期保存请在-20℃冻存，避免多次反复冻融。 8. 如果存在较高背景的情况，请调整抗体的用量，并增加洗膜次数。 9. 试剂盒内所有试剂请于2-8℃保存，避免冻融。 【使用方法】 本产品适用于转膜完成后的封闭及抗体孵育步骤，以5 cm×8 cm 膜为例： 1．漂洗液准备：取10 ml Wash Buffer（10×）用蒸馏水稀释至100 ml，即为1×WashBuffer，待用。每次洗膜用8-10 ml。 2．封闭：转膜完成后，将膜浸没到10 ml Blocking Buffer中，室温封闭5分钟。 3．漂洗：倒掉封闭液，加入8-10 ml 1×Wash Buffer，于摇床上用较大速度漂洗1分钟。 4．洗膜的同时可准备抗体孵育液：取Antibody Pretreat Solution（HRP/Mouse）100 μl到离心管中，加入鼠源一抗3-10 μg，枪头吸打至充分混匀，室温孵育5分钟。加入至10 ml Dilution Buffer中，充分混匀。 注意：1）一抗的用量也可根据抗体的稀释度来进行调整。以抗体的最终稀释度1:1000为例，取100 μl抗体反应液HRP（鼠）到EP管中，加入10 μl一抗，加入到10 ml 抗体稀释液中，充分混匀，室温孵育5分钟。 2）如果膜面积较小，可按比例减少抗体、反应液及稀释液的用量。 5．完成步骤3后，倒掉漂洗液，将一抗、Antibody Pretreat Solution（HRP/Mouse）及Dilution Buffer混合而成的抗体孵育液加到膜上（确保孵育液完全浸没膜表面），在摇床上以60 rpm左右的速度室温孵育40分钟。 6．弃去（回收）抗体孵育液，用配制的1×Wash Buffer漂洗3-5次，每次3分钟。 7．进行后续检测。建议采用ECL或者DAB法进行检测。 【常见问题及解决方案】 【备注】 本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。 北京聚合美生物科技有限公司 Mei5 Biotechnology, Co., Ltd 北京市海淀区学院路甲5号768创意园B-1211 热线电话： （86）01