原位蛋白质组学技术与应用研究.pdf

原位蛋白质组学技术与应用 杨帆‘引，王鸿丽圳，刘锋嘲，刘念‘副，马庆伟…，王洪奇㈣，魏井华椰‘ 1．北京蛋白质组研究中心，北京，102206；2．国家生物医学分析中心，北京，100850；3．清华大学生物医学 测试中心，北京，100084；4．毅新兴业(北京)科技有限公司，北京，100080；5．布鲁克道尔顿公司，北京，100081 经典的蛋白质组学常常需要进行严格的蛋白提取和样本制备过程，而原位蛋白质组学主 要是指直接分析或仅需非常简单处理后分析器官、组织或细胞的蛋白质组。如早期的激光捕 获显微切割(LCM)定位采集组织的细胞样本并直接连接到MALDI质谱分析多肽和蛋白质的 尝试，以及震动科学家的“解析电喷雾电离(DESI)”对人皮肤、花卉表面的有机物与多 肽组分析n1，可视为原位蛋白组范畴。 目前最成熟的原位蛋白质组(多肽组)技术应该是生物组织质谱扫描成像技术(Imaging Mass Spectrometry，IMS)。它是生命科学中一项崭新的分析技术，是一种全新的分子成像 技术。它最早由R．MCaprioli于1997提出幢1。该技术通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质 组织样品，结合专业质谱图像处理软件，获得组织切片中化合物的分布，产生任意指定质荷 比(m／z)化合物的二维离子密度图，从而对生物组织中化合物的组成、相对丰度及分布情况 进行高通量、全面、快速的分析。与其他分子成像技术相比，生物组织质谱扫描成像技术具 有许多优点。首先，它使成像不再局限于特异的一种或者几种蛋白质分子，而是能够同时分 析生物组织切片中所有的组分(包括多肽和蛋白)。IMS能给出组分的二维分布图像，得到 这些多肽和蛋白在组织切片上的空间分布和相对丰度等特有信息，从而可进一步将质谱成像 图与光学显微镜下观察的组织病理学特征关联起来。其次，它无须将组织中的蛋白和多肽提 取出来，不必对目标分子染色。 目前，质谱扫描成像技术主要基于基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI—MS)。现阶段MALDI 离子源多与飞行时问质量分析器联用，如MALDI-TOFMS或MALDI—TOF／TOFMS等，典型的商 u 业仪器如德国BRUKER公司的AutoFlexMALDI-TOF-MS可以得到低分辨(200m)的图象。 MS)或四极杆一离子阱(MALDI—Q-ITMS)联 也有与四极杆一飞行时间质谱(MALDI—Q--TOF 合使用。最新的联用方法是与离子淌度一飞行时间联用质谱(MALDI—IM—TOFMS)结合。在离 子淌度一飞行时问联用质谱中，可获得被分析离子的粒径大小、空间结构等有关信息。要获 得生物组织中组分，尤其是小分子化合物的信息，必须使用串联的质谱分析器。最近还有报 道MALDIMS和傅立叶变换(FTIcR-MS)质谱联用(MAI，D卜_FTMS)实现生物组织质谱 扫描成像技术的。生物组织质谱扫描成像技术对质谱仪的性能要求非常高，各从事该技术研 Fax Tel1207 ·：Email：wkh@cnhupo．gn 29 究的实验宣、公司正投入大量时间、金钱在仪器的研发工作上，到目前为止．质谱成像 技术已开始与先进的临床诊断技术比对，如，在某些肿瘤诊断方面MAL埘一lMs比帆I更曼敏”’。 本文探讨了“切片转移，基质喷潍，分辨率控制以及重复性和稳定性提高”的质谱成像关 键技术。{殳计了新型靶盘和新型基质喷雾装置，并申请了专利。建立了具有良好重复性的 质谱成像方法方法。考察了组织保存搠对质谱成像的影响。新鲜组织吨O℃冰箱中可保存 18个月，覆盖基质后一20℃仅能保存两天。 将建立的方法应用到正常和肝M辐射后大鼠海马组织的质谱成像囤差异分析。找到差 异分子199个，差异组分分子毒均小于6000Da。对部分差异分子进行了鉴定，共鉴定出18 个蛋白。差异蛋白主蔓涉及细胞骨架、能量代谢、生物合成、信号转导、应激等功能。差 异分子的鉴定结果提示，微波辐射致海马损伤效应可能是一个多蛋白参与的复杂过程。 由于新鲜组织存在来源紧缺、保存困难等问题．而太多数生物组织采用桶尔马林同定 方式保存，并投造成蛋白质的降解