厌氧发酵产生琥珀酸的菌种筛选简报研究.pdf

发酵工程学科的进展 ——第四班奎固发酵工程学术讨论套论文集 厌氧发酵产生琥珀酸的菌种筛选简报 朱蕾营，郏璞，刘字鹏， 孙志浩’ (江南大学生物催化研究室扛南大学工业生物技术教育部重点实验宣．无锡214036) 琥珀酸(succinic acid)又名丁二酸，是一种用途广泛的有机化工原料。在医药工业中 用于合成镇静剂：避孕药及癌症治疗药物。在化学工业中广泛用于生产染料、醇酸树脂、 玻璃纤维增强塑料、离子交换树脂。琥珀酸还可用于分析试剂、食品铁质强化剂、清洒添 加剂等。近年来。琥珀酸的应用领域不断拓展，国际市场需求量迅猛增加[1]。 目前，琥珀酸主要通过顺丁烯二酐的水解生产。化学合成的琥珀酸由于依赖于石化 原料，微生物发酵可再生原料生产琥珀酸的方法倍受重视o“]。发酵法生产琥珀酸利用 可再生糖源(如葡萄糖)和二氧化碳作为主要原料，成本低廉且开辟了温室气体二氧化碳 利用的新途径，显示了环境友好的特征。国外上世纪九十年代就开始发酵法生产琥珀酸 的研究，其中研究Anaerobiospirillum succinogenes， 珀酸产量在10～110g／L之间，但未见大规模工业化生产的报道[1“]。国内在这方面的 研究尚处于起步阶段，白冬梅等对琥珀酸放线杆菌的发酵液用高效液相色谱进行分析检 测，48h发酵液中含有琥珀酸9．58 g／L[“。 本文简要报道从牛的瘤胃中分离筛选能发酵生产琥珀酸的细菌SW0580，并对其进 行了生理生化特性鉴定与16SrRNA基因序列分析，确定其属于琥珀酸放线杆菌(Acti- nobacillus succinogenes)。 1 材料与方法 1．1菌株与培养基 1．1．1菌株 琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus 1593，由本 实验室从牛的瘤胃中分离获得并鉴定‘”3。 1．1．2培养基 0．2 10 富集培养基：玉米浆20 g，CaCl2g，MgCOIg。 g．葡萄糖15g，富马酸钠5．88 基金项目：国家973项目资助(No．2003CB716008) 江苏省自然科学基金(No．BK2005201) 长江学者和刨新团队发展计划资助(No‘IRT0532) 通讯作者：Tel：0510- 朱营蕾等：厌氧发酵产生琥珀酸的菌种筛选简报 1．0 0．2 K2HPO‘3．0g。NaClg，(NH‘)2SO·1．0g，MgCl2g，定容至1L，pH6．5；筛选平 5 2 板培养基：富马酸钠25g，蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCIg，NaHC03g，半胱氨酸盐酸 0． 盐1g，琼脂206；种子培养基：葡萄糖5g，酵母膏5g，玉米浆5g，NazHPq·12HzO 5 0．5 g，NaH2PO‘·2HzO L，pH6．5；发酵培养基：葡萄糖 g，混合维生素lmL，定容至1 20～80 1．1 0．9 g。酵母膏15g，玉米浆10g，Na2HPO‘·12H20g，NaH2PO‘·2H20g， 15～60 NaCl1 0．2 0．2