沉默lycB基因对雨生红球藻类胡萝卜素合成代谢的影响研究.pdf

遗 HEREDITAS(Beijing)2013年2月 ISSN0253-9772 WWW．chinagene．ca 研究报告 DoI：10．3724／SP．J．1005．2013．00233 沉默lycB基因对雨生红球藻类胡萝 卜素合成代谢的影响 龚文芳，路立京，刘鑫，陈喜文，陈德富 南开大学生命科学学院分子遗传学实验室，天津 300071 摘要：雨生红球藻是一种淡水浮游单细胞绿藻，逆境条件下可积累大量的类胡萝 卜素。番茄红素是类胡萝 卜素 中的一种，是类胡萝 卜素合成代谢中的一个重要中间产物。番茄红素p．环化酶(LycB)是催化番茄红素形成p．胡 萝 卜素的关键酶。文章以杜 氏盐藻 lycB基因为干扰序列，构建了含卡那霉素与阿特拉津双抗性的 RNAi载体 p1301．BS—RNAi。将其 电转化进雨生红球藻细胞，经抗性筛选、基因组PCR及 RT-PCR筛选，获得了16个独立 的干扰株系。选取生长 良好的7个进行高光诱导，发现其番茄红素含量增加了99．4％，3-胡萝 t-素含量减少了 48．4％，即通过异源的lycB．RNAi基因沉默可抑制番茄红素向 3-胡萝 卜素的转化。对 比分析发现，番茄红素增 加量仅是p．胡萝 卜素减少量的5％，表 明因lycB．RNAi抑制而产生的番茄红素的95％又被其他通路转换成了其 他代谢产物，因此要实现雨生红球藻番茄红素含量的大幅增长，需协同调控其他代谢通路。 关键词： 雨生红球藻；番茄红素B一环化酶；RNAi；番茄红素；代谢通路 EffectofsilencinglycB geneonthecarotenoid synthesisinHaema- tococcuspluvialis GONGWeln-Fang，LU Li·Jing，LIU Xin，CHEN Xi—Weln，CHEN De—Fu LaboratoryofMolecularGenetics，CollegeofLfieSciences，NankaiUniversity，Tianjin300071，China Abstract： Haematococcuspluvialisisafreshwaterplanktonicsingle-cellmicroalgae．Itwillaccumulatehighamountof carotenoidsunderunfavorableenvironmentalconditions．Asoneofcarotenoids，lycopeneisanimpo~antintermediatein thecarotenoidbiosynhtesispathway．Lycopene13-cyclase(LycB)isthekeyenzymethatcatalyzeshtecircularizationof lycopenetoform31-craotene．Inthisstudy,weconstructedap1301一BS—RNAivectorusinglycBrfomDunaliellasalinaas hteinterferencesequencewithknaamycinandatrazineresistna cemarke~andhtentrna sfomr editintoH pluvial~byelec— rtoporation．Sixteen independenttrna sgeniclineswereobtainedafterresistance selection，genomePCR，andRT-PCR na alyses．Sevenwell—grownlineswereselectedtodeterminehtecontentsofcarotenoidsbyHPLC na alysisafterinducing byhighlight．Thelycopenecontentintheselineswasincreasedby99．4％whilehte13-carotenecontentwasdecreasedby 48．4％．indicatinghtattheinterferencebyheterogenousc8couldinhibittheconversionoflycopeneinto31-carotene．The amountofincreaseinlycopenewasonly5％ofhteamountofdecreaseinI~-craotene．indicatingthat95％oft