检测2型鸭疫里氏杆菌抗体间接ELISA方法的建立研究.pdf

中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会论文集 3．5通过表(四)可以看出活疫苗一灭活疫苗混合一次性免疫效果也非常好，诱导HI抗体水平可以达到9 个los2，是任何一个单苗接种都不能达到的，同时保护期也比较长，可达到80天，是减少接种次数的好办法。 致谢 本实验得到王家福、魏学峰、尹忠良等专家的大力支持，再此深表感谢! 参考文献 [1]中华人民共和国农业部编《中华人民共和国兽用生物制品质量标准》二00一年版． [2]中华人民共和国农业部编《中华人民共和国兽用生物制品规程》二00一年版． [3]张振兴，姜平主编《实用生物制品技术》中国农业科技出版社ISBN7—80119—192—7／S。91． [4]魏建平等，所著“不同免疫途径对肉鸡新城疫气管黏膜抗体的影响”，．《中国畜牧兽医学会禽病学分会第十二次学术研讨会论文集}2004 年9月，贵州，贵阳中． 检测2型鸭疫里氏杆菌抗体间接ELISA方法的建立+ 程龙飞1一，施少华1，傅光华1，李文杨1，彭春香1，黄瑜1，陈溥言2 (1福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州350013 2南京农业大学农业部畜禽疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京210095) [摘 要] 本研究以2型鸭疫里氏杆菌裂解物作为包被抗原，以辣根过氧化物酶标记的兔抗鸭IgG抗体为第二抗体，以 TMB为显色剂，成功地建立了检测鸭血清中2型鸭疫里氏杆菌抗体的间接ELlSA方法。经检测表明该方法特异性强，敏感性 比常规的试管凝集试验高320倍。以该方法对免疫2型鸭疫里氏杆菌灭活油乳剂疫苗的鸭群进行抗体水平的跟踪测定，发现 试验鸭于免疫后7天开始产生抗体，28天达到最高峰，然后开始下降，于免疫后56天其抗体水平仍高于免疫后14天的水平。 [关键词】2型鸭疫里氏杆菌；抗体检测；间接酶联免疫吸附试验 鸭疫里氏杆菌(Riemerella 素性心包炎、肝周炎、气囊炎、脑膜炎、关节炎等病变，已造成严重的直接经济损失；此外，还导致僵鸭增多、淘 汰率高、饲料转化率降低、生长发育迟缓等带来的间接经济损失也十分巨大。我国各地均有该病的流行，严 重影响我国养鸭业的发展。 目前检测鸭血清中鸭疫里氏杆菌抗体的方法有平板凝集试验、试管凝集试验、琼脂扩散试验和ELISA方 法等。平板凝集试验操作简单，能在短时间内判断结果，适合基层单位应用，但与试管凝集和琼脂扩散试验 immunosorbent 了检测1型、1型、4型鸭疫里氏杆菌抗体的酶联免疫吸附试验(enzyme—linkedassay，ELISA)方 法。Huang等(2002)H1用rP45N 体的表面并保持其免疫活性，抗原或抗体与酶形成的酶结合物仍保持其免疫活性和酶催化活性的基本原理， 将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，用于细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所 在部位，或在微克、纳克水平上测定抗原或抗体的含量。该方法特异、敏感，是当前应用最广、发展最快的 项新技术。本研究针对我省主要流行的2型RA，建立检测其抗体的间接ELISA方法，用于检测2型RA疫苗 免疫后抗体的消长情况，为制订最佳免疫程序提供依据。 *福建省自然科学基金资助项目，编号：B0310025 程龙飞(1971～)，男，硕士，副研究员，从事畜禽传染病研究。 一95— 10ts of AssociationofAnimaland Science ofthe Branch,Chinese Proceedings Biological Veterinary Symposium 1材料与方法 1．1 材料 1．1．1 2型RA菌株福建省农科院牧医所禽病室分离、鉴定并保存的菌株。 1．1．2辣根过氧化物酶标记的兔抗鸭IgG抗体(简称酶标二抗)南京农业大学动物医学院张炜博士惠 赠。 1．1．3强阳性血清、阴性血清和待检血清购进10日龄健康北京鸭5羽，隔离饲养。2型鸭疫里氏杆菌纯 培养后灭活、离心，取菌泥加少量生理盐水重悬，与1．2倍体积的氟氏完全佐剂(做为首免抗原)或氟氏不完