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抗J亚群禽白血病病毒囊膜糖蛋白特异性
单克隆抗体的研制及其特性一
秦爱建 崔治中 (江苏．扬州，扬州大学动物医学系225009)
ALY
LEELUCY，FADLY
(Aviandlseaseand 48823USA)
1aborat。ry。USDA．EastLansing—MI
oncology
，1／
、／
摘要一J亚群禽自血病病毒(ALv—J)是一种主要感染肉用塑鸡的反转录病毒僻研究用表达ALV—J囊膜蛋白
基因产物时Sf9细胞免疫Balb／c小鼠，取其睥脏细胞与骨髓瘤细胞Nsl进行融台，获得了4株特异性抗ALV—J的
J毒株反应，而不能与ALV的A、B、c、
单克琏抗体。免疫荧光分析结果表明，三株单克隆抗体仅与所试验的ALV
D和E亚群的毒株反应。有趣的是．有一株单克隆抗体可以与所有试验的外源性ALV毒株反应，但不与内源性的
E亚群反应。westernBlot和免疫沉淀试验结果表明，单克隆抗体识别的ALV—J囊膜糖蛋白的分子量为90～
94kD，识别未糖基化的囊膜蛋白分子量约为53kD。用这些单克隆抗体能检测出ALV—J病毒感染鸡旺成纤维细胞
中的病毒抗砸。f这些结果提示这些单克隆抗体可用于ALv—J疾病的诊断和流行病学调查a
关羹词禽白血病病毒J亚群囊膜蛋白 单克隆抗体 7
鉴定出来的新的病毒亚群，在商品肉用型鸡中ALV呈现流行趋势。由于肿瘤死亡，胴体废弃等而
造成严重的经济损失一”2。在ALvJ特异的蛋白质中，病毒子的表面囊膜糖蛋白是主要的亚群特
异性决定因素o]，这些新毒株作为一种新的独立的囊膜亚群已得到其核酸序列的验证“4。然而，有
关J亚群病毒的快速检测方法目前尚未建立，ELIsA检测病毒群特异性抗原(gsa)虽然可以检测
ALv—J
gsa，但这种试验同时也能检测出某些样品中的内源性的病毒gsa。PcR方法受到ALV—J的
env基因序列和正常鸡群中同源基因。”的干扰，另外还受到抗原变异性的困扰o]。单克隆抗体在分
子生物学和临床诊断中是非常有用的工具．本研究试图通过研制抗ALV—J特异性单克隆抗体以用
于ALV—J分子生物学上更深入的研究．同时为临床诊断提供高质量的检测试剂。
l材料与方法
ADoL
1．1 病毒 Hcl，AI)oL一6803，ADoL一48l
and
Disease
49、RAV一50、RAV—o株均由Avian
士赠送，并仅用于体外实验。RAV—l、RAV一2、RAV
Lab，usDA，East
OncoIogy Lansi“gM1保存，分别代表ALV亚群A、B、c、D和E。
1．2细胞
Lab。ratones，Grand
生长培养基。
Nsl小鼠骨髓瘤细胞生长于HT完全培养基，融合筛选培养基为HAT培养基。
1．3免疫和融合
一178
主旦董塑量壁芏量点童芏堡金星±选芏查煎生叁堡皇望
用于研制抗ALv—J特异性单克隆抗体的免疫原为重组杆状病毒感染并表达env基因产物的
sf9细胞01，根据计算机分析，该基因产物有很好的抗原性，用这些破碎的含有重组基因产物的细
胞接常规方法免疫10周龄的Balb／c
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