脊髓灰质炎病毒Sabin2株结构蛋白VP1在昆虫杆状病毒表达系统中的表达.doc

 【基础研究】 脊髓灰质炎病毒 Sabin2 株结构蛋白 VP1 在昆虫杆状病毒表达系统中的 表达 刘金花 董关木 安祺 曹守春 孔艳 【 摘要 】 目的 在昆虫杆状病毒表达系统中表达脊髓灰质炎病毒（Poliovirus，PV）Sabin2 株结构蛋白 VP1。方法 从 Sabin2 疫苗原液中 RT-PCR 扩增 PV 结构蛋白 VP1 基因，克隆入 pFastBac1 质粒，转化含杆状病毒穿梭载体 Bacmid 的 E. coli DH10Bac，获得重组杆状病毒表达质粒 Bacmid-VP1，在脂质体介导下转染 sf9 昆虫细胞，获得重组杆状病毒 rBac-VP1。将第 2 代 rBac-VP1 感染 sf9 细胞，间接免疫荧光法检测 VP1 蛋白的表达，并优化感染条件。结果 重组杆状病毒表达质粒 Bacmid-VP1 转 化子可扩增出 3 203 bp 的目的片段；第 2 代 rBac-VP1 的滴度为 6 × 107 pfu ／ ml，其感染的 sf9 细胞在荧光显微镜下可见绿色荧 光，以不同 MOI 的 rBac-VP1 感染 sf9 细胞，VP1 蛋白表达量差别不大，而在 96 h 内，随着感染时间的延长，VP1 蛋白的表达量逐 渐升高。结论 在昆虫杆状病毒表达系统中成功表达了 PV Sabin2 株结构蛋白 VP1，为脊髓灰质炎亚单位疫苗的研制奠定了基 础。 【关键词】 脊髓灰质炎病毒；Sabin2 株；VP1 蛋白；杆状病毒 【中国图书分类号】 R373． 2 ＋ 2 Q786 【文献标识码】 A 【文章编号】 1004-5503（2011）06-0625-04 Expression of Structural Protein VP1 of Poliovirus Sabin2 Strain in Insect Baculovirus Expression System LIU Jin-hua，DONG Guan-mu，AN Qi，CAO Shou-chun，KONG Yan（National Institutes for Food and Drug Con－ trol，Beijing 100050，China） 【Abstract】 Objective To express the structural protein VP1 of poliovirus（PV）Sabin2 strain in insect baculovirus expression system． Methods VP1 gene was amplified by RT-PCR from the bulk of PV vaccine prepared with Sabin2 strain，and cloned into vector pFastBac1． The constructed recombinant plasmid pFast-VP1 was transformed to E． coli DH10Bac carrying baculovirus shuttle plasmid Bacmid，and the obtained recombinant plasmid Bacmid-VP1 was transfected to sf9 insect cells in mediation of liposome to prepare recombinant baculovirus rBac-VP1． The sf9 cells were infected with rBac-VP1 of passage 2 and determined for expression of VP1 by IFA，based on which the condition for infection was optimized． Results The target gene fragment at a length of 3 203 bp was amplified from the transformants of Bacmid-VP1． The rBac-VP1 of passage 2 reached a titer of 6 × 107 pfu ／ ml，with which the infected sf9 cells showed green fluorescence under fluorescent microscope． The expression levels of VP1 in sf9 cells infected with rBac-VP1 at various