九孔鲍苗掉板死亡病原海藻施万氏菌的分离鉴定研究.pdfVIP

福建凌订 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19．23 九孔鲍苗掉板死亡病原海藻施万氏菌的分离鉴定 周晶1蔡俊鹏1’2+王志2韩韫2 1华南理工大学生物科学与工程学院，广州天河五山，510640 2华南理工大学食品学院，广州天河五山，510640 diversicolor 摘要：从变白掉板九孔鲍(Haliotis 优势菌株27#。回归感染实验表明，其能引起鲍苗变白并掉板死亡，与自然发病表现类似， 20EvX及16S CFU／mL。API rDNA扩增测序分析均鉴定该菌为海藻施万氏 72h时LDso为1．8x104 菌(Shewanella 四环素(TE)和新生霉素(NOV)具有抗药性。 关键词：海藻施万氏菌，九孔鲍苗，病原菌，回归感染试验，药敏试验 已I’圭‘ 、，J 口 随着鲍鱼养殖业的发展，集约化程度的提高，养殖环境的恶化，各种由细菌引起的成鲍病 苗大规模死亡(业内称之为“掉板症”)白2002年以来一直危害着九孔鲍养殖业，使南方鲍鱼 产业由未发病前的5亿元的规模下降到2亿元左右。鲍苗掉板症一般发生在从附板到30d鲍 龄这段时问内，症状为大量鲍苗变白，进而死亡掉板。该病害目前已成为鲍养殖中的“瓶颈”【4J。 虽然现今对能引起成鲍患病的病原菌已经进行大量系统的研究，如大连地区1993年夏季 发生了河流弧菌II引起皱纹盘鲍的“脓鲍病”【2】，亮弧菌引起杂色鲍的“溃烂病”【5J，荧光假单胞 杆菌引起皱纹盘鲍幼鲍的“溃烂病”【61等，并且提出一系列防治的方法。但对于引发鲍鱼幼体 研究【7】，并认为溶藻弧菌(Vibrio (postlarvae)的病害外，目前尚未见有其它相关的报道。 本实验室于2003年间从鲍鱼养殖场一次培苗过程中变白掉板的九孔鲍苗中分离得到一株 优势菌．27号，并对其进行了种类鉴定、致病性以及抗药性研究。现将结果报道如下。 1材料与方法 1．1患病九孔鲍苗 取自2003年～鲍鱼养殖场培苗过程中附板12天的变白掉板九孔鲍幼苗。 1．2培养基 1第一作者，刷晶(1980一)，女，在读研究生，主要从事生物技术方面的研究丁=作。水通信作 者：fobjpcai@scut．edu．cn 福毽覆Q 第三届海洋生物高技术论坛 200s．08．19-23 1．3所用抗生素敏感性纸片 所用抗生素药敏纸片购自杭州天和微生物试剂有限公司，一20。C保存。 1．4病原菌分离 无菌条件下，先用无菌人工海水冲洗12d鲍龄的变白鲍苗，然后加适量的无菌人工海水， h 把它研磨成浆，取出一定量的样品，涂布1二2216E海水固体培养基平板上，于28。C培养48 后，选取优势菌落重复划线纯化，镜检确认。 1．5回归感染试验 回归感染实验是在与某鲍鱼场相隔不远的一水产研究所里进行的。所试鲍苗为附板20天 鲍龄。 苔，制成菌：悬液，加入到盛有1L灭过菌且暴过气的沙滤海水的烧杯中。细菌数量用紫外分光 CFU／mL)。 光度·汁测定(600nm)其OD值‘71，结合平板计数法调整成4个浓度(103，104，105，106 试验时，取附着‘r藻膜的鲍苗20只，用无菌海水冲洗5次，放到试验所用的烧杯中。试验 设平行样4个。在实验过程中，温度保持在25C左右，pH为8左右，不添换海水，不加饲料， 鲍苗变白并从藻膜上脱落即判其为死亡。分别在24h，48h和72h后观察膜上鲍苗的存活情况， 计数掉板的鲍苗数，计算每天的致死率，对掉板鲍苗进行菌株的再分离和鉴定。致死率(％) (LD50)L8]。 试验过程共设两组对照：空白和阴性对照。无菌悬液的作为第一组空白对照，另用本实 验室分离到的一株已被证明是无害的菌株作第二组阴性对照，这组对照的主要目的是检验菌 株的加入不会造成试验鲍苗缺氧死亡。 1．6