近红外光谱法用于尿液多成分分析.docx

近红外光谱法用于尿液多成分分析刘伟玲1张思祥2虞启琏1冉多钢2赵学玲1(1.天津大学精密仪器与光电子学院,天津,300072;2.河北工业大学测控系,天津,300130)摘要尿液分析在临床检验中是一个重要的检测项目,红外光谱法的应用将可实现无试剂的尿液快速分析。介绍了采用光谱法对尿液样品主成分进行的近红外分析,实验中对最佳光程长作了选择与计算。实验结果证实了近红外光谱法用于尿液临床分析的可行性及优越性。关键词近红外光谱法最佳光程长尿液主成分分析thonyShawR.在中红外区域用干膜法进行了尿的成分测量。2001年HeiseHM.应用红外光谱法对肌酐、尿酸、葡萄糖、蛋白四种成分进行了测量1,2。国内目前尚无相关报道。国外文献中的实验也多因精度原因未能普及到临床应用上。对于尿液分析,红外光谱法的优点是:无需任何试剂;成本低,可靠性高;无需预处理;快速,所用样品量少(微升),无污染;从一条光谱中可获得多个分析物的值;对样品无破坏,可重复使用样品,适于在线和大量重复测量。利用较为经济的光栅或声光可调滤光器(AOTF)等分光元件,可实现尿样中生化成分的近红外光谱法测量,测量精度能够满足临床及大范围普查的应用。1前言尿液标本的收集对病人来讲没有痛苦,是一种容易获得的检验标本,其组成变化不仅能反映泌尿生殖系统的病变,而且能反应其它疾病所引起尿液成分的变化。尿液的生化和显微镜检查可以为临床提供广泛的诊断佐证,其作用是其他实验室检查所不能替代的。目前国内尿液检验设备主要依赖进口,多采用生化法及干化学法。生化法检测常用的有ISF(离子选择电极),酶学电极法,糖氧化电极法,光电比色法,比浊法。国内外医院所使用的大多数尿液分析仪均采用化学方法,存在试剂消耗量大的问题。采用光谱法测量尿中代谢物如:葡萄糖、白蛋白、尿素、肌酐等具有临床意义。目前定量测量尿中丙酮、尿素、肌酐的常规方法还没有出现,只能用试纸法进行的半定量测量。红外光谱法用于尿液测量一直是国际上的研究热点。1996年AnthonyShawR.等人采用近红外干膜法对尿样中的尿素、肌酐、蛋白三种成分进行了测量,其光谱范围:5000cm-1～4000cm-1。1996年DOUX.采用拉曼光谱法测量葡萄糖、丙酮、尿素、肌酐的浓度值。2001年An2实验部分22.1仪器与试剂SpectrumGX系列傅里叶变换光谱仪(Perkin-Elmer公司)配置如下:近红外光源,石英分束器,InSb检测器,一次性注射器,可变光程长样品池。实验用溶剂:尿样,蒸馏水,尿液单质成分(固体粉末),包括葡萄糖、白蛋白及肌酐。2.2实验条件作者简介:刘伟玲,女,1973年9月出生,河北邢台人,河北工业大学讲师,天津大学在读博士生,主要从事测控仪器的研究与开发。讨论与研究分析仪器2004年第1期48光谱采集范围10000cm-1～4000cm-1,扫描分辨率为4cm-1,每个样品扫描16次取平均值,光谱数据以1cm-1为间隔采集。温度控制在35±1℃。2.3数据处理将得到的能量光谱以空气为背景,转换成吸收光谱,以便PLS分析用。数据处理采用Unscram2bler多变量分析理处理软件(挪威CAMO公司)。高和适用性广。实验表明,在尿液中某一成分含量基本保持恒定的前提下,对于不同颜色和混浊状态的尿液,光谱测量数据有较大的差异。因此,为了保证测量模型的可靠性、重复性及精度,所做的主要工作是排除颜色及浊度等因素对分析的影响。3.2吸光度及最佳光程长的计算吸光系数随不同的物质、环境及波长而异,所以它可以表示一个物质的吸收特征。在近红外波段,不同物质具有不同的吸收特征。图1为尿液中四种主要成分的吸光系数曲线。结果与讨论样品的近红外吸收光谱特性尿液的红外光谱法测量要求实验模型的可靠性33.1图1尿液中四种主要成分的吸光系数曲线目前的实验样品都是均匀分布的液体,所以符合朗伯-比尔定律。根据这一定律可将傅里叶变换红外光谱仪测得的谱图根据需要转换为不同的吸收程长度增大导致透过光强度I呈指数衰减,考虑到噪声的存在(光谱测量中噪声是不可避免的),如何选择最佳的光程长度L以获得最佳测量信噪比是至关重要的。近红外光谱谱带宽而且强度较弱,要想从中提取微弱的信号进行分析,就必须提高测量灵敏度,即提高单位被测组分浓度变化所引起的光强变化,以减少因噪声引起的浓度误差。选择最佳光程长是提高测量灵敏度的重要方法。根据朗伯-比尔定律:n谱3。吸光度A,计算公式为:A=ln(I0/It)其中I0为空样品时的能量光谱,It为被测样品的能量光谱,文中称之为样品扣除空气背景后得到的吸光度值4。吸光度差dA的计算公式为:∑iiii-αCL(2)I=I0e=1dA=A样品-A纯水≈ln(It纯水/It样品)(1)dciI0e-∑αСL∑αi(3)dI=-Ldcj其中,It样品为