河套蜜瓜子叶离体培养再生芽发生的形态学和组织学研讨.pdfVIP

蔬 菜 河套蜜瓜子叶离体培养再生芽发生的形态学和组织学 研究—— 李连国 贾宇臣 何勇 韩红岩 李巧玲 (内蒙古农业大学农学院，呼和浩特010019) 摘要将河套蜜瓜子叶外植体在附加6-BA0．5rag／L的MS培养基上进行再生芽诱导，研 究再生芽形成过程中形态学和组织学变化．结果表明；再生芽发生部位具有明显的轴端极性和轴面 极性现象，再生芽是由分生细胞团分化而来，属于直接器官发生型。 关薯词河套蜜瓜，子叶，再生芽发生；形态差帮组织学‘极性 河套蜜瓜是内蒙古河套地区的特产，色香味荚，质量上乘，颇受人们喜爱，但由于易受病害 侵染且不耐贮藏和运输，严重制约着这一著名的特产的产业化发展和经济效益的提高。基因工 程技术是培育耐贮、抗病河套蜜瓜新品种的有效途径。高效植株再生体系是转基因技术的基 础，随着现代生物技术的迅猛发展，甜瓜在组织培养方面已取得了很大进展，但关于河套蜜瓜 组织培养过程中有关组织解剖学的观察至今尚无报道。到底哪些细胞在离体再生过程中最先 启动，再生芽发生的组织来源如何，这些问题无论是对高效再生体系的建立，还是对河套蜜瓜 基因工程的研究都非常重要。为此，我们在前人研究的基础上，结合我们研究进展的需要，对河 套蜜瓜子叶进行了离体再生培养，定期取样，进行组织解剖学观察，为河套蜜瓜基因工程技术 奠定基础。 1材料与方法 1．1材料 河套蜜瓜成熟种子。 1_2子叶外檀体的获得 选择硕大饱满无病虫害的种子，用0．1％升汞进行表面消毒灭菌7min，用无菌水冲洗4～ 5次，将其浸泡在无菌水中6h，在无菌条件下将种子切除种胚，去掉种膜，将两片子叶分开，把 单片子叶的上端切掉，取近轴端子叶块用于试验。 1．3培养基和培养条件 0．5 附加6-BArag／L的MS培养基为再生芽诱导、伸长培养基(1号培养基)，附加IBA 400 养温度(25土1)℃，光照时间16h／d，光强2 Ix。 1．4形态学和组织学观察 从外植体接种培养基开始，定期(间隔2d)取数块外植体，在解剖镜下观察外植体形态变 化并用Otympus体视显微摄影仪照相后，用FAA液固定24 h以上，然后进行常规石蜡切片， 切片厚度6～8 pm，用番红——固绿对染，中性树胶封片，在Olympus显微镜下观察并照相。 2结果与分析 2．1子叶外植体再生芽发生过程殛形态学变化 2．1．1再生芽发生过程及形态学斐化 园艺学进展(第六辑) 将河套蜜瓜子叶外植体接种于1号培养基上诱导再生芽发生。接种3～4d，子叶块颜色逐 d，在解 渐由乳白色转为绿色，并增厚，膨大，在解剖镜下观察切口处还无可见变化。培养6～9 剖镜下看到，子叶外植体形态上发生了可见变化。绝大多数子叶块上出现了绿色圆锥状小突 起，随着培养进程的继续，新突起增多，原突起进一步发育。绿色突起伸长，形成大量肉眼可见 的细密芽丛(图版I一1)，为使芽丛萌发，2周后，将外植体继代1次，如果芽丛块过大或外植体 扭曲变形严重，可切分后再转入伸长培养基中进行芽丛伸长培养。培养1～2d，芽丛进一步发 育，呈现不同形态，有一些再生芽萌发成具有完整茎、叶结构的再生芽(图版1—2)，有的只具有 叶雏形，有的只发育成单叶片，这说明外植体上的芽丛明显处于不同发育阶段。 芽丛伸长培养两周时，当部分优势芽伸长具有两片叶时，应及时切离，这样有利于芽丛内 其他再生芽伸长。切离下的再生芽转入2号培养基上进行生根培养，1周左右就可以形成具有 2～3条不定根的再生植株(图版I一3)。 2．1．2子叶外植体再生芽发生的极性现象 河套蜜瓜子叶外植体再生芽发生部位具有明显的极性现象。观察外植体再生芽发生形态 学变化表明，所有的再生芽都是在外植体的形态学下端发生，未见外植体的形态学上端有再生 芽发生，由此可见，子叶再生芽发生具有轴端极性现象(图版I一1)；另外还可以观察到，再生芽 的发生具有轴面极性现象，即所有的再生芽均是在子叶近轴厩发生，无论以远轴面接触培养 基，还是以近轴面接触培养基，对这种极性现象均无影