流式细胞术研究60Coγ对SMMC7721周期的影响研究.pdfVIP

流式细胞术研究加Co Y对SMMC．7721周期的影响 党秉荣 马秋峰李文建．郝冀芳王菊芳谢漪郭传玲 中国科学院近代物理研究所兰州730000 照。研究了不同照射剂量和不同培养时间下丫射线对体外培养细胞周期的影响。 l、引言 肿瘤可以说是细胞周期紊乱造成的。因此细胞周期的研究成果为探索肿瘤的发生、发展和治疗方法 提供了极其重要的生物学资料。大量的研究表明：肿瘤的恶性程度与细胞周期密切相关。处于细胞 周期不同时相的肿瘤细胞对药物的敏感程度不同，一般情况下处于增殖期的细胞较为敏感。另外， 不同药物所作用的细胞周期时相亦不同，即存在周期特异性。放射生物学研究表明；电离辐射作 用后可改变细胞的周期进程¨一1，包括Gl期阻滞、S期延迟和G2期延迟。辐射细胞周期紊乱是 机体对外界刺激的一种保护性反应，目的在于保证基因组的遗传稳定性。对于不同的细胞可引起 Gl期阻滞、G2期阻滞或S期阻滞的不同变化。因此，研究电离辐射作用后不同肿瘤细胞周期的不同变 化，不但具有重要的生物学意义，而且对放疗后实施化疗过程中有目的地选择化疗药物具有重要的实际 意义。 2、材料和方法 2．1细胞及其培养 外加15％灭活小牛血清，100 2．0 p U／mL青霉素，NaHC03 g／L，100g／mL链霉素，每天换液一次，每 2．3天消化传代一次。辐照前l天将所有培养细胞消化混合分别接种于80个均匀的25ml培养瓶中，置 5％C02培养箱37℃培养。辐照时选取密度适宜的指数生长期细胞。留少许培养液，以保证辐照时细胞 的正常状态． 2．2辐照及辐照后细胞的细胞周期的检测处理 辐照是在兰州医学院附属第一医院放疗科∞CoY机上进行。剂量为O，0．2，0．4，0．6，0．8，1，1．2， 1．4，1．6，2，4，6和8 Gy，每个剂量3个样品，剂量率为0．21Gy／m。 mL 离心8min弃废液。用lPBS悬起，缓慢一滴一滴滴入4 106／mL。300目筛网过滤细胞至流式细胞仪上样管中。重新 悬细胞，用PBS调整细胞浓度为(0．5．1)X u A(失 悬于500l的H／Triton Il u FACS 活的)，40l的500 PI染液)，室温避光孵育30rain，用流式细胞仪毋ecton2Dikson g／mL Calibur) Cellquest收集细胞周期数据，ModFit分析实验数据。采用统计学f检验法处理实验数据。 3、结果和讨论 3．1流式细胞术对吒oT辐照4和24hSMMC--7721细胞周期的研究 表l给出了∞Co 化以2Gy剂量为界被分为两个区域。当剂量小于2Gy时，Gl期细胞数随剂量下降：S期急剧上升至0．4Gy， 然后趋于缓慢下降；G2／l订期急剧下降至0．4Gy，然后趋于缓慢上升。当剂量大于2Gy时，各时相细胞 数基本保持不变。 Do。e—— 丕旦堕塑旦塑占萱塑壁塑亘坌些!堑i一—— (Gy)——__J型坐—?———————』—一． 鱼巡 垒塾 兰兰垒 堡垒 兰堡 —-—_———竺————j至!L一一一 Control53．35士0．24‘ 54．99士1．27 37．89士O．40 39．674-0．85 8．76士0