补充1氨基酸理化性质.pptVIP

2.7.2 离子交换层析 离子交换树脂是具有酸性或碱性基团的人工合成聚苯乙烯—苯二乙烯(polystyrenedivinylbenzene)等不溶性高分子化合物。聚苯乙烯—苯二乙烯是离子交换树脂的基质(matrix)。 阳离子交换树脂，如—SO3H（强酸型）或—COOH（弱酸型），可解离出H+，对于在酸性环境中的氨基酸阳离子，它们可以和H+发生交换而“结合”在树脂上。 同样的阴离子交换树脂含有的碱性基团如—N(CH3)3OH（强碱型）或）—NH3OH（弱碱型）可解离出OH-,能与溶液里的阴离子交换而结合在树脂上。 分离氨基酸混合物经常使用强酸型阳离子（阳离子交换树脂）交换树脂。 氨基酸在树脂上的牢固程度，主要取决于他们之间的静电吸引，其次是氨基酸侧链与树脂基质聚苯乙烯之间的疏水作用。 在pH 3左右，氨基酸与阳离子交换树脂之间的静电吸引力的大小次序是： 碱性氨基酸（A2+）＞中性氨基酸(A+)＞酸性氨基酸（A-）。 洗脱氨基酸的有效方法是： 逐步提高洗脱剂的pH和盐浓度（离子强度）。 2.7.3、高效气相色谱 层析系统固定相为涂渍在固体颗粒表面的液体，的流动相为气体如氢，氦、氮，称为气液层析或气液色谱(gas—liquid chromatography)，简称气相层析或气相色谱。 待分析的样品被气化，气化了的样品将在流动的气相和固定的液体之间发生分配而被分离。被分开的组分和载气直接进入检测器。 气相层析法具有微量快速的优点，限制是要求样品能气化和热稳定性高。 2.7.4、高效液相色谱 高效液相层析(high performance liquid chromatography，简称HPLC) 曾称高压液相层析(high pressure liquid chromatography)。特点是： ①使用的固定相支持剂颗粒很细，因而表面积很大；② 溶剂系统采取高压，因此洗脱速度增大。 多种类型的柱层析都可用HPLC来代替，例如分配层析、离子交换层析、吸附层析以及凝胶过滤。 层析分类 分类原则 类型 特征 据溶质分子与固定相相互作用的机理不同 吸附色谱 离子交换色谱 疏水作用层 金属螯合色谱 共价作用色谱 分配色谱 凝胶过滤 亲和色谱 吸附力不同 各物质与固定相之间的离子交换能力的不同 各物质与固定相之间的疏水作用的强弱不同 各物质与固定相上的金属离子的络合能力的不同 巯基化合物的巯基与固定相表面的二硫键作用力不同 各物质在两液相间的分配系数不同 各物质的分子大小或形状不同 利用生物大分子与各种配基的生物识别能力不同 据实验技术 低压色谱 中压色谱 高压色谱 电泳 操作压力小于0.5 MPa 操作压力在0.5～5 MPa之间 操作压力在5～40 MPa之间 溶质分子在电场中的移动速度不同 据固定相的形状不同 柱色谱 纸色谱 薄层色谱 固定相装在玻璃、不锈钢或有机玻璃柱中 固定相为以氢键与纤维素羟基结合的水 固定相在玻璃平板上铺成薄层 据流动相的物态不同 气相色谱 液相色谱 超临界流体色谱 流动相为气体 流动相为液态 流动相为液态 按操作方式不同 迎头法 顶替法 洗脱法 将混合物溶液连续通过固定相，只有化学亲和力最弱的组分以纯粹状态最先流出，但其它各组分都不能达到分离。 利用一种化学亲和力比各被结合组分都强的物质来洗脱，这种物质称为顶替剂。此法处理量大，且各组分分层清楚，但层与层相连，故不能将组分分离完全。 将混合液尽量浓缩，使体积缩小，引入固定相的一端，然后用溶剂洗脱，洗脱溶剂可以是原来溶解混合物的溶剂，也可选用另外的溶剂。 作业题 ? P29 :4 名词解释 1.等电点（pI） 2.必需氨基酸 生成酰氯 * 画2组，分别是4个分液漏斗！分液口在上面，固定相比重大。样品固定在固定相上。 * 举例：pH=3,各类氨基酸带点不同，吸附力依次减弱，碱性和中性，酸性氨基酸 * ?－氨基参加的反应 氨基酸的化学反应 ?－羧基参加的反应 侧链功能基团参加的反应 2.6 氨基酸的化学反应 (1) 与亚硝酸反应 这是Van Slyke（范斯来克 ）法测定氨基酸的基础。 测量氮气的体积可计算氨基酸的含量。 2.6.1 α-氨基参加的反应 (2)与酰化试剂反应 这些酰化试剂在多肽和蛋白质的人工合成中被用作氨基的保护试剂。 与2，4－二硝基氟苯的反应 在弱碱性溶液中，氨基酸的α－氨基容易与2，4－二硝基氟苯的反应（DNFB）作用，生成稳定的黄色2，4－二硝基苯氨基酸（简写DNP－氨基酸）。 DNP-氨基酸（黄色） (3)烃基化反应:（sanger反应+Edman反应） （sanger反应） 氨基酸与2，4－二硝基氟苯的反应的应用 －－－ 多肽链N-末端氨基酸残基的鉴定 多肽