海洋假单胞杆菌碱性蛋白酶性质研究及其在羊毛加工中的初步应用研究.pdfVIP

～ 接建厦n 第三屠毒洋生麓育技术论坛 200s．08．19-23 海洋假单胞杆菌碱性蛋白酶性质研究及其在 羊毛加工中的初步应用+ 郝建华，孙谧+，王跃军，王清印 中国水产科学研究院黄海水产研究所，青岛，266071 摘要：本试验对一种新型海洋碱性蛋白酶的部分性质及其简单应用做了初步的研究。试验结 果表明：该蛋白酶的最适pH值为9．0，最适作用温度为50C。在温度低于35C时该酶可以较 好的保持其酶活性。在pH6—10的区间内也可以保持良好的酶活稳定性。该酶对金属离子的 耐受能力较强，cu2+对该酶有激活作用，与常见的增稠剂及化学试剂配伍性良好。在处理羊 毛方面，该蛋白酶可以较好的水解磷脂层，而对皮质层的损害比较轻微，表现出良好的处理 羊毛特性及方展潜力。 关键词：海洋碱性蛋白酶；化学性质；羊毛处理 碱性蛋白酶广泛存在于细菌、放线菌和真菌中。其中以芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究最为 广泛和深入。这种酶除水解肽键外，还具有水解酯键、酰胺键和转酯及转肽能力，可用于制 革、丝绸、医药、食品和生物化学试剂等领域【1，2】。 碱性蛋白酶自从1960年被引入洗涤工业以来，一直是洗涤剂原料研究发展的热点【3】。但 碱性蛋白酶在其他方面也有着及其重要及广泛的用途。早在本世纪初就有人研究过蛋白酶脱 毛。酶脱毛具有简化生产工艺、缩短周期、提高成品质量、增加得革率、降低生产成本、改 善劳动条件与环境卫生，变污水为农业肥等优点【4～7】。目前，利用碱性蛋白酶处理羊毛，属 于国内外研究热点课题之一，羊毛除了炭化、漂Lq多b，其防缩、机可洗、防起球、丝光、柔 软、抑制刺痛感、增加服用性等加工，最常用的方法是氯化处理，但却存在着严重AOX和环 境问题，因此上述各类加工中，酶整理显得日益重要。酶处理时不仅表层蛋白质有水解，而 且反应也深入其内部。对酶而言要分解覆盖在毛表面最外层含高交键度的胱氨酸鳞片层及疏 水性外层角质细胞要比分解内层及细胞膜复合体(CMC)困难得多。因此在酶处理过程中，酶对 羊毛内层分解损伤所引起的副作用已大大超过了酶处理的目标值——剥鳞和削棱。如何将酶 的水解作用最大限度地限制在毛纤表面，是当今科研攻关的首要问题。 本论文着重研究了一种新型海洋碱性蛋白酶(YS．894．122)的一些初步应用，以应用为 目的，研究了该酶的一些常规的各项性能参数。对酶解羊毛的实验做了初步的研究。为以后 的进一步深入研究提供了理论依据。 l材料与方法 1．1实验材料与试剂 海洋碱性蛋白酶粉及其余实验用酶由黄海水产研究所海洋酶工程实验室提供。羊毛样品由青 +国家十五“863”资助课题(2003AA625070) 木：通讯作者：孙谧。Email：!!塑堕i盟!兰!i：箜：塑 238 疆建覆订 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19．23 岛宝陆莱制衣有限公司提供。试验用分子量标准蛋白、酪蛋白、两性电解质等为进口分装。 其它分析、测试用化学试剂均为国产分析纯。 1．2实验方法 1．2．1碱性蛋白酶活性的测定 碱性蛋白酶的测定方法—Folin酚试剂测定法。 1．2．2碱性蛋白酶最适pH和最适温度的测定 6～7；0．05M硼砂一硼酸 M磷酸缓冲液pH 以酪蛋白为底物，并用不同pH值缓冲液(O．02 8；0．05MIris．HCL9．0；0．05 pH pH M硼砂．氢氧化钠pH9．】1)配制1％浓度的酪蛋白溶液， min，测定不同温度下该蛋白酶的活性变化。 按Folin法测酶活力。取最适pH，反应时间为10 1．2．3温度及pH对酶活力稳定性的影响 测定不同温度条件下，该蛋白酶保温30min和60 min后酶活力的变化。测定pH不同条 件下，20℃保温60m