常规分子生物学操作要点 PPT.ppt

常规分子生物学操作要点;重组DNA技术的原理;*;*;;*;*;*; 实验设计 所需的各种DNA片段及其排列次序 ORF 酶切位点 实验方法和操作; 基因工程的操作过程;*;*;*;*;*;*;*;*;*;质粒DNA－碱裂解法原理;核酸的检测;原理;琼脂糖凝胶电泳;不同浓度琼脂糖凝胶的分辨能力 ;*;凝胶电泳的优点;常用的指示剂有溴酚兰和二甲苯青及银染色.溴酚兰在碱性液体中 呈紫兰色，在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同。二甲苯青的水溶液呈兰色，在 1%和1.4%琼脂糖中迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA相似. 指示剂一般与蔗糖、甘油组成载样缓冲液. 作用有①增加样 品密度.②在电泳中形成肉眼可见的指 示带，可预测核酸电泳的速度和位置.③使样品呈色，加样操作更方便 ;溴化乙锭染色;*;DNA分子大小的检测;提高转基因植物中外源基因表达的策略;SCMRP基因设计、合成;图3 植物表达载体pBENM的构建;ORF; 酶切位点 通过克隆载体引入酶切位点 通过PCR引入酶切位点（需测序） 部分酶切 Adaptor的使用 克隆的先后次序;通过克隆载体引入酶切位点;部分酶切;通用植物表达载体pBHT-5的构建 ;衔接头设计 BS1: 5’-GATCC