植物离体受精研究概.pptVIP

三、合子培养及受精前后卵细胞和中央细胞的培养 合子培养直到20世纪90年代才有报道，但其发展最为迅速，技术最为完善，并已再生可育植株，随培养技术的不断改进，将会有更多植物的合子培养获得成功。卵细胞离体培养的结果不理想，还需深入研究，中央细胞的培养已有了良好基础并在个别植物上取得了成功。 3.1 合子培养 各种植物的合子在分离方法、培养方法、培养条件、培养时发生的细胞学变化、发育过程和发育途径等方面均有异同。 目前，惟一一例离体融合产生的合子培养获得再生杂种植株是在玉米中实现的。研究表明，从离体受精到植株开花约需100天，形成的籽粒具有正常发育的胚和胚乳。 3.2 卵细胞培养 卵细胞的培养相对困难，但在外力的刺激和适当的条件下，卵细胞具有不经受精即启动胚胎发育的潜能，这将有助于在人工控制的条件下开展卵细胞的激活、分裂及孤雌生殖等相关研究，同时，作为单倍体的卵细胞，如能培养成功，可直接获得单倍体植株，将为遗传转化和作物改良提供优良的实验体系。 对水稻而言，分离的卵细胞呈球形、无壁的原生质体，开花前1-2天的卵细胞表现极性分布，细胞核和细胞质位于一端，大液泡位于加一端；细胞质索从中央向外周延伸，明显可见。开花当天极性消失，胞质均匀分布，外周具多数小液泡。 Fig 5示水稻受精前后卵细胞的分离与合子培养。 Fig 5示水稻受精前后卵细胞的分离与合子培养 A.开花前2天的卵细胞原生质体，呈现出明显的极性分布，细胞质和细胞核位于一侧，另一侧为大液泡； B.开花前1天的卵细胞原生质体，仍呈现极性分布，但已减弱。 V：液泡 C.分离的一个卵细胞培养1天后3个细胞仍相互紧贴，卵细胞胞质位于中央，色泽深，退化助细胞胞质和核已消失，仅为具壁的空细胞，宿存助细胞胞质稠密且均匀分布； D.开花后6h的合子原生质体，细胞质均匀分布，细胞核位于中央。 DS：退化助细胞；EC：卵细胞；PS：宿存助细胞。 E.合子培养1天后分裂成2个细胞，仍保持球形，箭头指出分裂面； F.合子培养6天后分裂成多细胞球形原胚 离体受精研究意义 1.为受精生物学的重要理论问题的探索与解决开辟了新的途径； 2.用于遗传育种中可以克服那些以花粉—柱头或花粉—花柱相互作用为基础的自交不亲和性障碍，进行作物改良。 简介 植物离体受精技术是利用分离方法将雌、雄配子置于离体控制条件下进行操作，完成被子植物的精卵融合而且利用受精所产生的离体“合子培养”再生植株，做到整个受精与胚胎发育过程完全在离体条件下完成。可排除体细胞组织的干扰，用于探索精、卵细胞的识别和合子的激活的问题。 此外离体受精操作有可能为单倍体育种、远缘杂交、基因工程等应用领域提供新的技术手段，现已成为植物发育生物学和植物生殖生物学的一个研究热点。这样的实验系统的建立对基础研究和高新技术研究均有重大意义。因此，把离体受精的成功看作植物受精研究史中的重要里程碑是没有夸张的。 植物离体受精成功的技术基础是： 1. 植物雌、雄性细胞的分离 2. 植物雌、雄性细胞离体融合 3. 合子培养和新植株生成 1.1生殖细胞与精细胞的分离 生殖细胞与精细胞位于花粉粒或花粉管内，沉浸于营养细胞的细胞质中，以“细胞中的细胞”状态存在。因此，只有将其分离后，呈原生质体状态时，才能进行直接的操作与研究。 其分离方法大致可分为两类： 1.渗透压冲击法，利用低渗溶液促使花粉粒或花粉管尖端破裂，从而释放出精细胞或生殖细胞。 2.机械分离法，利用机械力量使花粉破损，用以游离出精细胞或生殖细胞； 机械力量 1.1.1生殖细胞的分离 由于各种植物花粉具有不同的生物学特性，因此为适用于不同的植物，生殖细胞的分离方法有四种： 1.一步渗透压冲击法。花粉置于低渗蔗糖溶液中保温一段时间后，花粉自行破裂，生殖细胞随营养细胞质流出，用此法分离出棉花生殖细胞。 2.二步渗透压冲击法。将花粉置于等渗溶液中培养，当大部分花粉萌发时，加入蒸馏水使渗透压骤降，导致花粉管尖端破裂，释放出生殖细胞。 3.低酶法。将花粉置于低浓度的酶液与低渗蔗糖溶液中保温，促使花粉破裂释放出生殖细胞。 4.花粉原生质体释放法。首先分离出花粉原生质体，然后用渗透压冲击法或机械法使花粉原生质体破裂，获得生殖细胞。 1.1.2 精细胞的分离 精细胞的分离与生殖细胞类似，但也各具特色。被子植物成熟花粉有两种类型：三细胞花粉与二细胞花粉。三细胞花粉的营养细胞中含一对精细胞，而二细胞花粉的营养细胞中仅含一个生殖细胞，精细胞是在花粉管内