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微生物的染色与形态结构的观察 作者：马文霞 同组人：皮雄 时间：2011年9月8日、15日、22日 单位：兰州大学生命科学学院生态学班 摘要：这次实验进行对微生物进行简单染色、革兰氏染色以及芽孢的染色、并在显微镜使用油镜对其进行观察，目的是了解并掌握光学显微镜的用法，能利用简单染色、革兰氏染色、芽孢染色的方法对芽孢进行染色，并观察其形态结构。首先我们使用接种环和酒精灯将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、四联球菌和巨大芽孢杆菌四种微生物固定到载玻片上；然后分别使用简单染色法、革兰氏染色法、芽孢染色法对其进行染色；最后使用光学显微镜对其形态和颜色进行观察。实验结果表明枯草芽孢杆菌显紫色为革兰氏阳性菌，大肠杆菌显红色为革兰氏阴性菌。结果表明，不同微生物的细胞壁有着两种不同的结构和组成，因此，可以通过革兰氏染色对微生物进行分类和鉴别；可以利用简单染色法对细菌的形态、结构进行大致的观察；不同微生物的细胞壁有两种不同的结构和组成，可以通过革兰氏染色对细胞进行分类和鉴别。 关键词：光学显微镜，革兰氏染色，简单染色，芽孢染色，油镜，枯草芽孢杆菌，大肠杆菌。 前言：普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。当前使用的显微镜都是由一套透镜组成的。普通光学显微镜通常能将物体放大1500-2000倍。细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，从而能更清楚地观察到其形态和结构。常用碱性染料进行简单染色，因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞常带负电荷，而碱性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。 1、1、1菌种 枯草芽胞杆菌，大肠杆菌，四联球菌，巨大芽孢杆菌 1、1、2溶液和试剂 二甲苯，石炭酸复红染液，结晶紧，碘液，番红液。 1、1、3仪器和其他用品 酒精灯，载玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，滤纸，滴管，接种环，载玻片夹子，无菌水等。 1、2 步骤和方法 1、2、1、显微镜的使用操作及注意事项 显微镜结构精密，使用时必须细心，要按下述操作步骤进行。 （一）观察前的准备 1、拿取显微镜时，要用右手紧握镜臂，左手托住镜座，平稳地将显微镜搬运到实验桌上。 2、将显微镜放在自己身体的左前方，离桌子边缘约10cm左右，右侧可放记录本或绘图纸。 3、调节光照 自带光源的显微镜，可通过调节电流旋钮来调节光照强弱。 4、调节光轴中心 显微镜在观察时，其光学系统中的光源、聚光器、物镜和目镜的光轴及光阑的中心必须跟显微镜的光轴同在一直线上。带视场光阑的显微镜，先将光阑缩小，用10×物镜观察，在视场内可见到视场光阑圆球多边形的轮廓像，如此像不在视场中央，可利用聚光器外侧的两个调整旋钮将其调到中央，然后缓慢地将视场光阑打开，能看到光束向视场周缘均匀展开直至视场光阑的轮廓像完全与视场边缘内接，说明光线已经合轴。 （二）低倍镜观察? 镜检任何标本都要养成必须先用低倍镜观察的习惯。因为低倍镜视野较大，易于发现目标和确定检查的位置。 将标本片放置在载物台上，用标本夹夹住，移动推动器，使被观察的标本处在物镜正下方，转动粗调节旋钮，使物镜调至接近标本处，用目镜观察并同时用粗调节旋钮慢慢升起镜筒（或下降载物台），直至物像出现，再用细调节旋钮使物像清晰为止。用推动器移动标本片，找到合适的目的像并将它移到视野中央进行观察。 （三）高倍镜观察? 在低倍物镜观察的基础上转换高倍物镜。较好的显微镜，低倍、高倍镜头是同焦的，在正常情况下，高倍物镜的转换不应碰到载玻片或其上的盖玻片。在转换物镜时要从侧面观察，避免镜头与玻片相撞。然后从目镜观察，调节光照，使亮度适中，缓慢调节粗调节旋钮，使载物台上升（或镜筒下降），直至物像出现，再用细调节旋钮调至物像清晰为止，将观察部位移至视野中央进行观察。 （四）油镜观察? 油浸物镜的工作距离很短，一般在0.2mm以内，并且无“弹簧装置”，因此使用油浸物镜时要特别细心，避免由于“调焦”不慎而压碎标本片并使物镜受损。使用油镜按下列步骤操作： 1、先用粗调节旋钮将镜筒提升（或将载物台下降）约2cm，并将高倍镜转出。 2、在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。 3、从侧面注视，用粗调节旋钮将载物台缓缓地上升，（或镜筒下降），使油浸物镜浸入香柏油中，使镜头几乎与标本接触。 4、从接目镜内观察，放大视场光阑及聚光镜上的虹彩光圈（带视场光阑油镜开大视场光阑），上调聚光器，使光线充分照明。用粗调节旋钮将载物台徐徐下降（或镜筒上升），当出现物像一闪后改用细调节旋钮调至最清晰为止。如油镜已离开油面而仍未见到物象，必须再从侧面观察，重复上述操作。 5、观察完毕，下降载物