27溶组织内阿米巴检验方法操作规程作业指导书.doc

1、目的 依据《寄生虫病检测检验技术》-2005建立溶组织内阿米巴检验（直接涂片法）检验方法操作规程，保证测定结果的准确性。 2、适用范围 本法适用于组织内阿米巴的测定。 3、责任 使操作者熟悉本规程，并在具体样品检验中，严格遵照操作，确保检测结果准确。 4、内容 4.1形态 本虫在生活史中分滋养体和包囊两个时期 4.1．1滋养体 4.1．1．1大滋养体：寄生于组织中，其体积较大，通常直径为20~30um，甚至可达50um。在新鲜标本涂片中，虫体内外质分界明显，外质透明，约占虫体的1/3；内质颗粒状，常含有被吞噬的红细胞。红细胞呈淡黄绿色，由于被滋养体消化的关系，红细胞的形状及大小可不一致。体内吞噬有红细胞及红细胞的形状、大小不一，是大滋养体的重要特征。滋养体不活动时为圆形或卵圆形，活动时形状变化不规则，外质伸出形成宽而透明的伪足，内质随即涌进伪足里，使虫体向前推进。伪足运动活泼而迅速，常作定向移动。核不明显，有时可隐约见到一反光性圆块。 在铁苏木素染色标本中，内质呈淡蓝黑色，外质的颜色更浅或不着色。核圆形，呈蓝黑色，核膜较薄，其内侧缘排列着一层大小均匀，排列整齐的染色质颗粒。核仁圆形，较小，常居中央。核仁与核膜之间可见到核网。被吞噬的红细胞呈蓝黑色。 4.1．1．2小滋养体：体积较小，直径约为7~20um。在新鲜标本涂片中，内外质分界不明显，通常外质仅见于伪足部分。内质呈颗粒状，其中常含有较多的食物泡。泡内含有细菌或真菌而无红细胞是其特点。核不易见到。静止时为圆形或卵形；活动时，形状不规则，伸出的伪足短小，运动缓慢。 在铁苏木素染色标本中，形态特征基本上与大滋养体相似，仅核仁较大。 4.1．2包囊：呈圆球形或卵圆形，直径约为5~20um，内含有单核、双核或四个核。四核包囊为成熟包囊。在未成熟的包囊内，常含有两端钝圆呈棒状的拟染色体及糖原块。这些储存的营养物质，常随着包囊的成熟而逐渐被原虫利用消失。两端钝圆的棒状拟染色体是本虫包囊的重要特征。在新鲜标本涂片中，包囊为淡绿色或卵清色的圆球形小体，囊壁及拟染色体无色透明，反光性较强，核不易看见，有时可见反光性的小圆块。 在碘液涂片中，包囊呈淡黄绿色或棕褐色，囊壁不着色，透明；核不着色，反光性较强，可见其数目为1~4个核（在不同平面上）；拟染色体也不着色，有时隐约可见。糖原块染成棕色或淡褐色，中央着色较深，边缘着色较浅而且模糊。这是碘液涂片后本虫包囊的一个重要特征。 在铁苏木素染色标本中，包囊壁不着色而透明，细胞质呈淡蓝黑色或灰蓝色，核的构造与滋养体基本相似，但核膜内侧缘的染色质颗粒常呈半月形变厚。单核包囊的核较多核者大而清晰，拟染色体明显，染成蓝黑色，糖原块因在染色过程中被溶解而成为空泡。 4.2检验 4.2．1粪便检查 4.2．1．1直接涂片检查法：通常采用生理盐水涂片法检查生活的滋养体。在检查时应注意与巨噬细胞等加以区别，大滋养体的特征是运动活泼，定向移动和吞噬红细胞，而巨噬细胞也能吞噬红细胞，但运动并不活泼。 在典型的阿米巴痢疾粪便中可见含有大滋养体，也含有很多聚集成堆的红细胞以及少量的白细胞、巨噬细胞和上皮细胞。在非典型粪便例如粥样或水样粪便里也可见有小滋养体或大滋养体。 4.2．1．2碘液染色检查法：常用此法检查包囊。包囊多见于慢性阿米巴痢疾患者或带虫者的成型粪便中。 4.2．1．3硫酸锌离心漂浮法：若标本中包囊数量很少而在涂片上不易检出时，可用33%硫酸锌溶液（比重1.180）漂浮法浓集包囊后，经碘液涂片法进行检查。 4.2．1．4铁苏木素染色检查法：必要时可采用本法进一步鉴定虫种。 4.2．2肝、肺脓肿的脓液检查：采用穿刺得来的脓液或咳出的痰液涂片镜检滋养体，但其检出率低。 4.2．3培养法：必要时可用培养法进行辅助诊断。常用洛克氏鸡蛋清培养基和肝浸液培养基进行培养。 附：人肠内阿米巴鉴别特征 滋养体 特征 溶组织内 结肠内 微小内蜒 布氏嗜碘 哈氏内 大小 小养体10~20um，大滋养体20~40um 20~50um 6~12um 5~20um 3~12um 伪足 为舌状或叶状，透明，伪足形成快 为钝圆形，不太透明，伪足形成较慢 为钝圆形，比较透明，伪足形成较慢 为钝圆形，不太透明，伪足形成较慢 伪足形成迟缓 活动力 运动活泼，有一定的方向 运动迟缓，没有一定的方向 运动迟缓，没有一定的方向 运动迟缓，没有一定的方向 运动迟缓 内质与外质的区别 明显 不明显 明显 不明显 明显 核 未染色 不易看到或稍能看到 能看到 稍能看到 稍能看到 看不到 铁苏木素染色 一个核，核膜内侧缘的染色质颗粒细而排列整齐，核仁居中央 一个核，核膜内侧缘的染色质颗粒粗而排列不整齐，核仁大，稍偏位 一个核，核膜内侧缘无或仅有数粒染色质颗粒，核仁大，形状不规则