应用实时荧光定量pcr方法定量检测双歧杆菌对.pdfVIP

微生物学通报 Aug. 20, 2015, 42(8): 1610−1617 Microbiology China © 2015 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.140861 生物实验室 应用实时荧光定量PCR 方法定量检测双歧杆菌对 Caco-2 细胞的黏附 杨丽梅 朱德全 孙娱 孟祥晨* (东北农业大学 乳品科学教育部重点实验室 黑龙江 哈尔滨 150030) 摘 要：【目的】采用实时荧光定量PCR 的方法定量分析黏附于Caco-2 细胞的双歧杆菌，并建 立一种快速有效分离黏附于细胞的细菌的方法。【方法】采用Triton X-100 溶液处理黏附于Caco-2 细胞上的菌体，确定获得最佳分离效果的处理时间；建立实时荧光定量PCR 定量检测双歧杆菌 的方法，获得标准曲线，进行特异性、灵敏度、重复性评价；应用建立的方法分析 11 株双歧杆 菌对Caco-2 细胞的黏附能力。【结果】Triton X-100 处理黏附于Caco-2 细胞的双歧杆菌的最佳作 用时间为10 min。实时荧光定量PCR 定量检测双歧杆菌的方法重复性好、特异性强、灵敏度高； 4 8 起始模板浓度范围在 10 −10 CFU/mL 之间具有良好的线形关系，相关系数99% ，在该浓度范围 线性方程为：y =−3.345 2x+37.637 0 。应用建立的方法定量分析双歧杆菌的黏附能力，与直接镜检 法相比差异不显著(P0.05) ，检测时间由48 h 缩短至4 h 。【结论】Triton X-100 分离处理结合实 时荧光定量PCR 方法是一种快速、有效的检测双歧杆菌对Caco-2 细胞黏附能力的方法。 关键词：双歧杆菌，黏附，Triton X-100 ，实时荧光定量PCR Application of quantitative real-time PCR for quantification of Bifidobacterium adhesion to Caco-2 cells * YANG Li-Mei ZHU De-Quan SUN Yu MENG Xiang-Chen (Key Laboratory of Dairy Science, Ministry of Education, Northeast Agricultural University, Harbin, Heilongjiang 150030, China) Abstract: [Objective] Bifidobacterium adherent to Caco-2 cells were quantitatively analyzed by quantitative real-time PCR, and a rapid and effective method to detach the bacteria from the Caco-2 cells was established. [Methods] Firstly, the Bifidobacterium adherent to the Caco-2 cells were treated by Triton