基因工程概论和工具酶.ppt

三、体外DNA重组 基因克隆的核心-----体外重组(Recombination) : 人工将一段目的DNA插入一个载体的过程。 四、重组DNA导入受体细胞 1、定义：外源DNA导入的细胞，是重组体扩增的场所。 转化（transformation）：在一定条件下，将质粒或以质粒为载体构建的重组DNA导入受体菌的过程。 转染（transfection)：在一定条件下，将噬菌体、病毒或以噬菌体、病毒为载体构建的重组DNA导入受体菌的过程 转化子：又称工程菌，即接受了重组DNA的受体菌。 2、对受体细胞的要求： 易于接纳外源DNA 无特异的内源性核酸内切酶 载体复制、扩增不受阻 与载体有互补性 感受态菌：是指细胞处于最适摄取和容忍外源DNA的状态 重组体导入受体细胞的方法： 1、氯化钙法 2. 电转化法 3. 脂质体转化法 4. 病毒介导 (三）转基因或 基因敲除动物 基本原理：基因同源重组 Mario R. Capecchi ，美国 Martin J. Evans ，英国 Oliver Smithies ，美国 2007年诺贝尔医学奖获得者 他们的贡献 因为他们在使用胚胎干细胞改造活体内特定基因的“基因靶向或基因打靶”技术等方面做出的突破性贡献。 This years Nobel Laureates have made a series of ground-breaking discoveries concerning embryonic stem cells and DNA recombination in mammals. Their discoveries led to the creation of an immensely powerful technology referred to as gene targeting in mice. It is now being applied to virtually all areas of biomedicine – from basic research to the development of new therapies Gene targeting is often used to inactivate single genes. Such gene knockout experiments have elucidated the roles of numerous genes in embryonic development, adult physiology, aging and disease. To date, more than ten thousand mouse genes (approximately half of the genes in the mammalian genome) have been knocked out. Ongoing international efforts will make knockout mice for all genes available within the near future. 组织特异性基因敲除 第三节 人类基因组计划与后基因组时代 一、人类基因组计划 二、模式生物的基因组计划  三、人类后基因组计划 四、后基因组时代新的分支学科 1．功能基因组学 2．结构基因组学 3. 生物信息学 4．比较基因组学 5. 蛋白质组学 6. 整体生物学 7. 药物基因组学 第二章 基因基本过程和研究策略 基因工程的目的 基因克隆(gene clonging) 基因表达(gene expression) -原核基因表达 -真核基因表达 - 无细胞表达 ----通过体外重组技术,将一段目的DNA经切割、连接插入适当载体，并导入受体细胞，扩增形成大量子代分子的过程。 基因克隆 (gene cloning） 基因表达（gene expression） 通过体外重组技术,将某一目的DNA经切割、连接插入适当载体，并导入受体细