植物育种第十二章.ppt

 遗传病的根治应该是基因治疗，但是基因治疗的难度很高。 1990 年第一例基因治疗临床试验使腺苷酸脱氨酶（ADA）基因进入骨髓细胞，再送回病人体内，治疗严重综合免疫缺失症（SCID）获得初步效果。 严重综合免疫缺失症（SCID）患儿从出生时起就必须生活在隔离室中。 实施基因治疗的必要步骤如下： 找到致病基因 克隆得到大量与致病基因相 应的 正常基因 采取适当方法把正常基因放回 到 病人身体内去 进入体内的正常基因应正常表达 克隆得到正常基因 以病毒DNA为载体 正常基因转入人体细胞 再转入病人身体 第四节 分子标记辅助育种 遗传标记是指可以稳定遗传的、易于识别的特殊的遗传多态性形式。 分为：形态学标记、细胞学标记、生化标记和分子标记。 分子标记是以遗传物质（DNA）的多态性为基础的一种新的理想的遗传标记。 棉花的芽黄、番茄的叶型、抗TMV的矮黄标记、水稻的的紫色叶鞘等形态性状标记，在育种工作中曾得到一定的应用。 以非整倍体、缺失、倒位、易位等染色体数目、结构变异为基础的细胞学标记，在小麦等作物的基因定位、连锁图谱构建、染色体工程以及外缘基因鉴定中起到重要的作用，但许多作物难以获得这类标记。 生化标记主要是利用基因的表达产物如同工酶与贮藏蛋白，在一定程度上可反应基因型的差异，它们在小麦、玉米等作物遗传育种中有所应用。但是它们受植株发育阶段与环境条件及温度、电泳条件影响，难以满足遗传育种工作的需要。 以DNA多态性为基础的分子标记，目前已在作物遗传图谱构建、重要农艺性状基因的标记定位、种质资源的遗传多样性分析与品种指纹图谱及纯度鉴定等方面得到广泛应用，尤其是分子标记辅助选择（molecular marker-assisted selection ， MAS ）育种更受到人们的重视。 图. 2003年全球转基因作物的种植国家 转Bt基因抗虫棉对棉铃虫的抗性表现 目前所种植的转基因作物主要为大豆、玉米和油菜等，其中以转基因大豆的种植面积最大。 转基因作物的主要目标集中在培育具有抗除草剂特性的农作物优良品种，其次为培育抗虫和抗病毒病新品种上。 我国转基因作物研究与利用概况 我国是世界上第一个商品化种植转基因作物的国家。自行培育的双价转基因烟草的抗病虫性达到60%，产量比对照可增加15%，产值可增加20%。 据农业部资料，我国已批准进行中试的转基因作物包括水稻、小麦、玉米、番茄、白菜、番木瓜、甜瓜、花生、棉花、烟草、广藿香等作物；主要目标性状是抗虫、抗病、耐盐、抗冻、耐储藏和抗衰老等。已批准环境释放的有水稻、玉米、大豆、马铃薯、番茄、甜椒、线辣椒、棉花、杨树、烟草等植物。 目前经农业部审查并经全国基因工程安全委员会批准商品化生产的作物已有我国自行研制开发的抗虫转基因棉花（转Bt及Bt + CpTI双价抗虫棉）、美国Monsanto公司开发的Bt抗虫棉，延迟成熟期的转基因番茄，抗黄瓜花叶病毒（CMV）转基因番茄，抗CMV转基因甜椒。转基因抗虫棉已在生产上大面积推广。 基因工程包括以下内容： 1）.从细胞和组织中分离DNA。 2）.利用限制性内切核酸酶酶切DNA分子，制备DNA片段。 3）.将酶切的DNA片段与载体DNA连接，构建重组DNA分子。 4）.将重组DNA分子导入宿主细胞后，在细胞内复制。 5）.重组DNA能随宿主细胞的分裂而分配到子细胞，使子代群体细胞均具有重组DNA分子。建立无性繁殖系(clone)或发育成个体； 6）. 从细胞群体中选出所需要的无性繁殖系， 并使外源基因在受体细胞中正常表达，翻译成蛋白质等基因产物、回收或筛选出获得定向性状变异的个体。 切 接 转 表达 一、目的基因的获取 基因克隆：获取目的基因的完整DNA片段或cDNA并使之在载体上大量复制的过程。 基因克隆是基因功能分子生物学研究和整个基因工程的起点，不论是揭示某个基因的功能，还是改变某个基因的功能，都必须先将所要研究的基因克隆出来，在此基础上才能进行改造修饰、构建表达载体和转化载体、建立植物转化与再生体系，最后对转基因植物中目的基因进行检测和分析。 1、功能克隆法 根据目的基因的功能即其表达的功能蛋白质或多肽为线索进行克隆的技术。 具体做法：首先分离和纯化目标性状基因所编码的蛋白质或多肽并进行氨基酸测序，进而推导出基因的核苷酸序列。 存在问题：基因表达合成蛋白质受植物发育阶段和环境的影响，有些基因表达的产量不足以进行氨基酸序列分析或制备抗体，有些基因表达的产