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* 皮肤病理石蜡切片技术 随笔总结 概述 （1）修材 （2）固定 （3）脱水 （4）透明 （5）浸蜡 （6）包埋 （7）切片 （8）摊片 （ 9 ）烤片 （10）脱蜡 （11）脱苯（水）→蒸馏水 （12）染色 （13）脱水 （14）透明 （15）封片 修材 一般修材不超过1.5× 1×0.2cm 但在实际工作中，平均修材在1.0 ×0.5 ×0.2cm左右 比较： 我们修材的大小一般要比口腔医院修的组织块小。大概有黄豆粒大小。 原因： 口腔医院包埋机提供的包埋框大小适宜，包埋时受组织大小的影响较小，而我们手工包埋大的组织较困难。 注意：组织块的大小修材受实际病变程度的影响，不能墨守常规，一概而论。 固定 中性10％福尔马林 1h AF液 0.5－1h 功能：①保持原有组织形态，防止细菌腐蚀标本。 ②AF液是固定和脱水过程中的过渡阶段，缓冲组织的收缩。 注意：口腔组织与皮肤组织的区别，不一定完全符合此种固定方法。 议: AF液相当于90%乙醇进行脱水，时间较短，简略了梯度酒精脱水的完整性，是否造成组织收缩程度加大？ 比较： 增加了AF液，相对比我们固定标本节约了约5个小时。 脱水 95%乙醇 1-1.5h 无水乙醇Ⅰ ≧1.5h 无水乙醇Ⅱ ≧1.5h 功能： 脱去组织中的水分，以便石蜡浸入。 注意：①水和石蜡不相容，需脱水彻底，以便制备出好的切片。 ②无水乙醇同样具有使组织收缩变硬的影响，故不能时间过长。 比较： ①我们95%乙醇采用两步脱水，以减小收缩力。 ②无水乙醇的脱水时间不超过2h，与此相比较，相差将近2倍。 议：无水乙醇脱水3-4h皮肤组织会不会变硬？ 3-4h 透明 功能: 二甲苯是酒精和石蜡的共同溶剂（媒剂）目的是为石蜡的浸入作媒介。 二甲苯Ⅰ 20min 二甲苯Ⅱ 20min 注意：二甲苯也能使组织变硬，故时间不宜过长。如果时间过长组织变硬，可以在香柏油中进行软化。 议：松节油透明较慢，我们会不会透明不彻底？是否加长透明时间？ 比较： 透明时间都相同，但我们用的是松节油进行组织透明。 切片 切3μm厚度 单次切片 比较：4-5μm厚度，连续切片 单次切片的特点：组织片不易褶皱 切片的时间较长 粘片的组织较少 切片机：LEICA（莱卡)RM 2255 LEICA（莱卡)RM2235 摊片 比较： 水浴温度不稳32-45 ℃极易造成组织片摊不开或张力过大而裂开。由于我们是连续切片，所 以玻片上的组织片大于四个。 水浴温度37℃ 每个玻片黏贴两个组织片 烤片 烤箱温度55℃ ≧1.5h 功能：是组织切片能够与玻片粘在一起，防止在染色过程中脱片。 注意：烤片过程中温度不能过高，防止烫伤组织。 比较： 我们烤箱温度不稳，在82 ℃左右烤≧1h。 脱蜡 二甲苯Ⅰ ≧12min 二甲苯Ⅱ ≧ 12min 功能：二甲苯溶解切片中的石蜡，以便染色。 注意：二甲苯脱蜡的时间不能太短，已达到脱蜡彻底的目的，否则不易染色！（石蜡不与染液结合） 比较： 时间都在20min左右，基本相同。 脱苯（水）→蒸馏水 无水乙醇 2min 95%乙醇 2min 80%乙醇 数秒 70%乙醇 数秒 流水冲洗 1-2min 蒸馏水 洗过 反酒精梯度 功能：脱去组织上多余的苯，使组织梯度进水水，进而染色。 比较： 我们没有反酒精梯度脱水，只用了95%乙醇进行脱苯1min。 注意：如果组织进入95%乙醇中有云雾状现象，说明二甲苯没有脱彻底或乙醇过陈旧、不纯。 染色 苏木素 5-10min 流水冲洗 数分钟 酸酒精（分化） 数秒 流水冲洗 ≧2min 1%氨水（反蓝） 1min 流水冲洗 充分 伊红 10s-1min 流水冲洗 数分钟 比较： 基本相同。 注意：染色时间的长短和组织的酸碱度和染液配制的时间有关，所以要以显微镜下观为准，不能一概而论。 酸酒精具有脱色作用洗不彻底，染色较淡。