谷氨酸甲基化修饰的基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱分析.pdfVIP

HUAXUE)研究报告 第10期 第41卷 分析化学(FENXI of 1505一1510 ChineseJournal 2013年10月 AnalyticalChemistry 谷氨酸甲基化修饰的基质辅助激光解吸电离- 串联飞行时间质谱分析 王勇“ 李水明1 何曼文2 冯里茹2 韩庆国1 (深圳大学生命科学学院，深圳市海洋生物资源与生态环境重点实验室1， 深圳市微生物基因工程重点实验室2，深圳518060) 摘要利用基质辅助激光解吸电离一串联飞行时间质谱(MALDI—TOF／TOF)高置信度地鉴定了枯草芽孢杆 菌中的蛋白酶抑制剂和杆菌肽F两种蛋白及其翻译后修饰，发现在这两种蛋白质中共有5个肽段发生谷氨酸 式。结果表明，MALDI—TOF／TOF高能CID所提供的丰富断裂信息和全质量范围扫描对提高分析结果的确定 性具有重要作用。此外，这5个甲基化肽段都可以检测到相对含量更高的非甲基化肽段，这为降低分析结果 98和143，说明发生了赖氨 的假阳性提供了辅助判据。在低质量区检测到甲基化赖氨酸的亚胺相关离子m／z 酸的甲基化；检测到m／z116则提示发生了谷氨酸甲基化。 关键词谷氨酸甲基化；基质辅助激光解吸电离一串联飞行时间质谱；枯草芽孢杆菌；亚胺离子 1 引 言 蛋白质的翻译后修饰(Post—translational 格的基因表达调控方式相比，PTMs更容易创造蛋白质性质的动态组合库，使得生物体能够快速适应各 种环境刺激¨J，因此，PTMs是蛋白质的功能调控、相互作用和动态反应的重要分子基础旧J。PTMs主要 包括蛋白质的磷酸化、糖基化、泛素、乙酰化和甲基化等，其中蛋白质磷酸化和糖基化蛋白质组学的研究 开展较早，针对这两种化学修饰蛋白建立了多种特异性分离方法¨。一。 目前，对蛋白质的甲基化修饰研究相对较少。早期研究发现，组蛋白赖氨酸与精氨酸残基的甲基化 甲基化修饰；有研究表明，与正常胰管细胞相比，在胰腺癌细胞的仅一烯醇酶中有更多的天冬氨酸和谷氨 酸发生甲基化，提示这些修饰可能参与了与肿瘤相关的病理生理过程¨…，以上工作均是在静电场轨道 laser ionizationtandemtime-ofmass (Matrix—assisteddesorption flight 谷氨酸甲基化的报道。本研究以枯草芽孢杆菌为实验材料，通过对一级质谱离子峰丰度的比较和二级 串联质谱的分析，阐明利用MALDI—TOF／TOF质谱分析谷氨酸甲基化的特点和优势，提高含甲基化谷氨 酸多肽和蛋白的鉴定置信度，为在组学水平上研究谷氨酸甲基化的生物学功能奠定基础。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 4800MALDI Series SCIEX公司)，仪器控制软件为4700 美国AppliedBiosystems／MDx ExplorerSoftware；超纯水处理 系统(Milli—Q，美国Millipore公司)；蛋白纯化系统(AKTA Sigma公司，使用前重结晶)；乙腈和三氟乙酸等其它试剂均为分析纯或优级纯。 2013-03．14收稿；2013-05-27接受 本文系国家自然科学基金(Nos31070731)资助 {E-mail：wyong@SZU．edu．CB 1506 分析化学 第4l卷 枯草芽孢杆菌从深圳红树林海泥中分离。 2．2胶内胰酶水解条件 切胶：将双向电泳分离后的目标条带用移液枪枪头切下，小心地