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第5章 微生物代谢调控
第五节 发酵过程的代谢调控和代谢工程;微生物的新陈代谢; 一 代谢调节(regulation of metabolism);;(一)酶合成的调节;1、酶合成的诱导; ; ;乳糖操纵子;
实验:
细菌在含有葡萄糖和乳糖的培养基上生长,优先利用葡萄糖。待葡萄糖耗尽时,在乳糖的诱导下,作用于乳糖的酶才产生,细菌开始利用乳糖。研究表明,上述现象由于葡萄糖降解物引起的,称为分解代谢物阻遏(葡萄糖效应)。
进一步研究发现,此调节基因的产物是环腺苷酸受体蛋白——亦称降解物基因活化蛋白(CAP);细菌乳糖操纵子的作用机制(降解物阻遏);;转录3; ;2、酶合成的阻遏;;色氨酸操纵子;1.酶活性的激活;;;(三)微生物代谢调节的模式;;直线式代谢途径的反馈控制;异亮氨酸合成途径中的直线式反馈抑制
;末端产物D和F协同反馈控制模式 ;末端产物D和F的累积反馈控制模式 ;顺序反馈控制的模式 ; 大肠杆菌合成苏氨酸、甲硫氨酸和赖氨酸中的同工酶调节
E表示末端产物反馈抑制;R表示末端产物反馈阻遏;二、代谢产物合成的调控;不同发酵条件对谷氨酸产生菌代谢方向的影响 ;;
(3)加入表面活性剂,将脂类从细胞壁中溶解:使细胞壁疏松,通透性增加
(4)控制Mn2+ 、Zn2+的浓度:
干扰细胞膜、细胞壁的合成。
;
3、添加前体绕过反馈控制点:
D
A B C
E F;;4、发酵与分离过程偶联;5、 培养基成分和浓度控制,解除分解代谢阻遏;;;三、 定向发酵;;;1;氨基糖苷类抗生素结构改造
M. purpurea 2-羟基GM
特养型 5-脱氧GM
2-差向羟基GM
M. inyoensis 突变霉素1
2-DOS-变株 突变霉素2;2、杂合生物合成(hybrid biosynthesis);突变生物合成与杂合生物合成模式图 ;3、外源微生物药物的生物转化; 几种通过不同方法制备的HMG-CoA还原酶抑制剂的化学结构
;四、 代谢工程;三、转移或构建新的代谢途径;四. 代谢工程;1. 加速限速反应;2. 改变分支代谢流向;3. 构建代谢旁路;4. 改变能量代谢途径;(二)、扩展代谢途径; COOH
O
HO
OH
O
CH2OH;在头胞霉素合成途径中,扩环酶将青霉素N催化形成去乙酰氧头胞霉素C
将链霉菌扩环酶基因(cef E)克隆后转化青霉菌(产青霉素V)
转化子可直接发酵产生去乙酰氧头胞霉素V
经过体外青霉素V酰化酶水解得到7-氨基脱乙酰头胞烷酸(7-ADCA)
是半合成头胞霉素的重要母核之一;黄原胶产生菌野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)不能利用乳清做碳源
将大肠杆菌的lacZY基因和Lpp 核糖体结合位点一起克隆到X. Campestris
工程菌可以利用乳清进行黄原胶生产
酿酒酵母不能直接利用淀粉产生乙醇
将淀粉酶基因克隆转化后,表达效率很低
用巴斯德毕氏酵母抗乙醇阻遏的醇氧化酶基因启动子表达淀粉酶基因,效率较高;(三)转移或构建新的代谢途径;1. 转移代谢途径;2. 构建新的代谢途径
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