第5章1 生物化学在环境科学中的应用.ppt

5.3.7 重组体的筛选 根据重组体的遗传表型筛选 抗生素筛选 营养缺陷型互补筛选 根据重组体结构特征的筛选 快速裂解菌落比较重组DNA的大小 限制性内切酶酶切鉴定 杂交分析 PCR筛选 5.3.8 外源基因在宿主中的表达 外源基因必须在调节元件控制下进行转录和表达 外源基因在原核细胞中的表达 宿主遗传背景清楚，培养简单，迅速适应大规模生产 缺乏适当的翻译后加工机制，后续纯化困难 外源基因在真核细胞中的表达 研究该基因在细胞中的作用和机制；获得足够量的纯化目的蛋白 5.3.9 基因工程在环境污染治理中的应用 基因工程为改变细胞内的关键酶或酶系统提供了可能 设计复合代谢途径，提高微生物的降解速率 拓宽氧化酶的专一性 维持低浓度下的代谢活性 改善有机污染物降解过程中的生物催化稳定性等 ——5.4 微生物细胞工程 是运用精巧的细胞学技术，有计划地改造细胞遗传结构，从而培育出人们所需要的生物品种或具有某些新性状的细胞群体 细菌、放线菌等原核细胞，生长迅速，DNA裸露于细胞质中，不与蛋白质结合，易于遗传操作，是细胞改造的良好材料；而其胞外由肽聚糖组成的细胞壁是细胞融合的主要障碍 基本操作：无菌操作技术、细胞培养技术、细胞融合技术 细胞培养 将细胞从生物体内取出，在特制的培养容器内给予必要的生长条件，使其在体外继续生长与繁殖 关键因素：营养和生长环境 动物细胞培养，植物的花粉、原生质体的培养等 细胞融合 在一定条件下，将两个或多个细胞融合为一个细胞的过程，又称细胞杂交 细胞融合已经成为遗传转化与研究的最有效手段之一 促融因子作用下，细胞凝集，质膜发生粘连，细胞质开始融合，继续培养过程中，发生核融合，形成杂种细胞 动物和植物细胞之间也可以杂交 细胞重组 在体外条件下，运用试验技术从活细胞中分离出各种细胞的结构或组件，再根据需要把它们在不同的细胞之间重新进行装配，成为具有生物活性的细胞 核移植主要采用微注射技术 细胞器移植技术微注射法、载体转移法、胞饮摄入法 遗传物质转移 基因在细胞水平上的转移 载体法：双子叶植物常用 直接导入法：直接将外源基因注入到一个受体的受精卵的核内，合子发育成胚 5.4.2 细胞融合构建环境工程菌 细胞质壁分离后去掉细胞壁所余下的部分结构称为原生质体 具备原有细胞的全部内部结构与生理性能，但完全无细胞壁，失去了细胞的刚性而呈球形，对渗透压十分敏感 容易吸收外来的DNA、蛋白质等，对外界理化因子比较敏感 原生质体融合方法 亲本的选择：选择两种适合于重组的亲本菌株，选定适宜的遗传标记 原生质体制备：选用适合的酶系，在等渗液中溶解细胞壁；真菌选用纤维素酶，细菌选用溶菌酶；注意对最佳条件的摸索 原生质体的再生：酶解后得到的原生质体能够在等渗的培养基中重建细胞壁，恢复细胞完整形态，并能生长、分裂的过程称为再生；这是以融合法进行细胞遗传结构改造的前提；再生率差距很大 原生质体的融合与融合子的检出 化学诱导法： 常用促融剂是聚乙二醇（PEG）及钙离子 PEG在相邻原生质体的流动质膜之间形成一种分子桥，沟通两个亲本的质膜，改变了质膜的某些性质，并降低了原生质体的表面势能，使质膜上的蛋白质凝聚，形成容易融合的无蛋白颗粒的磷脂双层区，导致原生质体进一步融合 电融合法： 快速、简便、融合率高 瞬时电脉冲使两细胞接触处的细胞膜发生破裂 原生质体融合构建环境工程菌 始于20世纪80年代，在生物降解反应中，微生物细胞互生现象普遍存在；通过原生质体融合技术将多个细胞的优势集中到一个细胞内 原生质体融合构建苯环化合物降解菌 原生质体融合构建纤维素降解菌 聚乙二醇诱导原生质体融合制备细菌杀虫剂 电融合诱导选育利用木糖和纤维二糖产乙醇的菌株 ——5.5 发酵工程 5.5.1 发酵概述 发酵的定义 发酵是微生物分解有机物，产生乳酸或乙醇和CO2的作用过程；也泛指一般利用微生物制造原料或产品的过程，可在无氧或有氧条件下进行 利用发酵工程的原理与技术，同时实现废物资源化，提高整体工艺的效益，降低运行成本 发酵工程的基本原理 单一的菌种在培养基中的纯培养 采用的菌种极为重要，培养与保存优良的生产菌种是发酵工艺的首要任务 发酵工程过程 发酵原料的预处理 发酵过程的准备 发酵过程：厌氧发酵和好氧发酵 产品的分离与纯化：离心除杂，进一步提炼 原料丰富，需要将其粉碎、蒸煮并水解成葡萄糖，以供给微生物利用 种子罐发酵制备大量的微生物菌种；无菌消毒是种子制备与发酵的`必要条件；还需要调节pH和添加必要的营养盐 5.5.2 发酵工程在环境污染治理中的应用 亚硫酸盐纸浆废液乙醇发酵 酵母循环系统：利用酵母-活性污泥二段式好氧处理废水的系统 废纤维素的资源化 有机固体废物的快速堆肥 第六章 水环境污染控制与治理中的生物化学 ——6.1