反式脂肪酸测定原理.docVIP

反式脂肪酸测定原理 原理： 甲基酯化：利用Tetramethyl ammonium hydroxide (TMAH) 对Triacylglycerol进行甲基酯化，降低脂肪酸沸点，以利气化进行气相层析仪分析脂肪酸组成。 利用气体作为移动相携带气化混合物，在固定相对混合物依极性的差异产生不同的吸附性与滞留时间，因此各成分物质在管柱内产生不同的移动速度以达到分离效果，再以检测器燃烧气体侦测电流变化。 气相层析仪管柱介绍： 管柱内涂上含右图所示化合物之液态薄膜，因非极性支链较多，藉此将极性较高的脂肪酸分离出，随着管柱温度提升依序分离出极性较低的脂肪酸达到分离各脂肪酸的效果。 样品前处理： 取1~4滴sample(需纯油脂)加入有盖的试管 ↓ 加入3ml乙醚溶解脂肪 ↓ 加入1ml TMAH ( Tetramethyl ammonium hydroxide )静置反应10min ↓ 加入1ml蒸馏水终止反应，取上层有机层加入含有1g以上无水硫酸铜的eppendorf ↓ 取出去水后溶液至干净的小棕色瓶内 ↓ 进行G..C.分析 气相层析仪操作步骤： 打开氮气瓶，再开启气相层析仪、积分仪与烘箱电源 ↓ 设定管柱温度梯度 ↓ 将N2压力调至1 kg/cm2 ↓ 开启H2与Air，并将压力设至H2 = 1kg/cm2，Air = 0.2kg/cm2 ↓ 点火，确认有无燃烧后，将压力调至H2 = 0.6kg/cm2，Air = 0.6kg/cm2 ↓ 设定积分仪 ↓ 注射标准品或样品进行分析 注意事项： sample若油脂含量少或含杂质则先萃取油脂再定量 前处理完之sample需保存于 -20℃ 冰箱 去除水分须完全，不可残留任何水分 目的： 利用衍生化反应(甲基酯化)，降低油脂之沸点，再以气相层析仪(Gas Chromatography)分析其脂肪酸组成，作为油脂种类及掺假判断证据之一。 二.原理： 三酸甘油酯(Triglyceride；TG)在酸或碱，可水解成甘油和脂肪酸。 层析法( Chromatography)的原理为溶质混合物在固定相(stationary phase)及移动相(Mobile Phase)中，因受到作用力大小不同，致使彼此分离者。 而气相层析仪乃采用惰性气体(N2、He等)为移动相，当移动气体携带气化的样品通过管柱的固定相时，样品中各成分彼此分离而先后流出，再利用H2 (g)、Air燃烧产生高温(2100℃)将样品离子化，当离子经过FID (Flame Ionization Detector)时，其导电度会随离子增加而增加，藉此表现不同的滞留时间(Retention time)，以分析(分离)样品中的脂肪酸之种类。 由于油脂或脂肪酸的挥发性较低，不适合直接以气相层析仪分析，一般都利用衍生化反应将其转成沸点较低的甲基酯衍生物。 甲基化反应常用之催化剂可分为： 酸性催化剂-三氟化硼(Boron Trifluoride；BF3)、硫酸H2SO4 碱性催化剂-甲基氧化钠(Sodium Methoxide；NaOMe )、氢氧化四甲基铵盐(Tetramethyl ammonium hydroxide，TMAH；(CH3)4NOH)。 本实验使用TMAH为催化剂，其甲基化反应如下：  1 Capillary Columns Liquid Phase 樣品不用處理即可注入嗎？ 確定分析的目的 GC法合適嗎？ (ex：樣品是否能氣化) 選定儀器、檢點各個部份及按鈕的位置等 No Yes 考慮別的方法 No 做前處理 Yes 選擇適當管柱及裝好管柱 啟動記錄器、檢測器(使用氫氣、空氣時須做漏氣檢察) 設定、調整操作條件 讓carrier gas 流動，做漏氣檢查 注入樣品 紀錄(感度改變、登錄下來) 解讀分析 依規定的操作順序恢復成規定的狀態 結果良好 結果不佳