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细菌内毒素检查法 ;2005年版中国药典细菌内毒素定量检查法修改草案 细菌内毒素光度法（定量法）实验技术 细菌内毒素光度法测定供试品的应用实例 动态浊度法鲎试剂的使用说明 定量法的应用举例 ;一、2005年版中国药典细菌内毒素定量检查法修改草案; 浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中浊度变化而测定内毒素含量的方法。根据检测原理，可分为终点浊度法和动态浊度法。终点浊度法是依据反应混合物中的内毒素浓度和其在孵育终止时的浊度(吸光度或透光率)之间存在着量化关系来测定内毒素含量的方法。动态浊度法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。 ; 显色基质法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特殊底物显色释放出的有色团的多少而测定内毒素含量的方法。根据检测原理，分为终点显色法和动态显色法。终点显色法是依据反应混合物中的内毒素浓度和其在孵育终止时释放出的有色团的量之间存在的量化关系来测定内毒素含量的方法。动态显色法是检测反应混合物的色度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测色度增长速度的方法。 ;光度测定试验应在特定的仪器中进行，温度一般为37℃土1℃。 为保证浊度和显色试验的有效性，应预先进行标准曲线的可靠性试验以及供试品溶液的干扰试验。试验环境中发生了任何可能影响检验结果的改变时，试验的有效性应重新检验。;标准曲线的可靠性试验;干扰试验;表1 光度测定法干扰试验溶液的制备;按所得线性回归方程分别计算出供试品溶液和含标准内毒素的供试品溶液的内毒素含量Ct和Cs，再按下式计算该试验条件下的回收率(R)。 Cs-Ct R = ————X100％ 入m 当内毒素的回收率在50～200％之间，则认为在此试验条件下供试品溶液不存在干扰作用。 当内毒素的回收率不在指定的范围内，须按“凝胶法干扰试验”中的方法去除干扰因素。并要重复干扰试验来验证处理的有效性。;检查法;二、细菌内毒素光度法（定量法）实验技术;定量法与凝胶法比较有许多优点：;（二）光度测定法的分类：; 浊度法：系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中浊度变化而测定内毒素含量的方法。 a.终点浊度法 依据反应混合物中的内毒素浓度和其在孵育终止时的浊度（吸光度和透光度）之间存在着量化关系来测定内毒素含量的方法。` b.动态浊度法 检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。;显色基质法：系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特殊低物显色释放出的有色团的多少而测定内毒素含量的方法。 动态显色法 检测反应物的色度到达某一预先设定的吸光度所需要的时间，或是检测色度增长速度 的方法。 终点显色法 依据反应混合物中的内毒素浓度和其在孵育终止时释放出的有色团的量之间存在着量化关系来测定内毒素含量的方法。上述方法，常用的为动态浊度法。 以上几种方法，常用的为动态浊度法。;（三） 动态浊度法数学模型的建立 固定参数：吸光度变化值（OD） 自变量：内毒素C 因变量：反应时间Tg 函数：f（lgC，lgTg） 函数关系式：lgTg = a – b lgC;（四）其他方法;三．细菌内毒素光度法测定供试品的应用实例;(一)实验材料及用具;（二）、标准曲线的有效性考察;（三）、供试品干扰实验;2．按下表制备光度法干扰实验的各种溶液;;（1）、定量法干扰试验的溶液具体制备方法： a) 取供试品的20倍稀释液0.5ml加入试管中，然后取相同体积的内毒素标准溶液（2EU/ml）加入同一支试管中，混合均匀即可得含内1EU/ml的样品供试品的40倍稀释液。 b) 取供试品的40倍稀释液0.5ml加入试管中，然后取相同体积的内毒素标准溶液（2EU/ml）加入同一支试管中，混合均匀即可得到含内毒素为1EU/ml的样品供试品的80倍稀释液。;（2）、试验结果及分析： 鲎试剂：批号：030702 规格：0.5ml/支 厂家：湛江海洋生物制品厂;线形回归方程LogT=3.0329-0.2536LogC，计算供试品溶液和含标准内毒素的供试品溶液的内毒素含量Ct和Cs，再按下式计算该试验条件下的回收率（R），以40倍稀释液的干扰试验为例： R=（Cs-Ct）/λm×100% =(0.9820-0.0820)/1.0×100%