国际上牛胚胎移植及胚胎工程PPT.ppt

国际上牛胚胎移植及胚胎工程应用现状 桑润滋 河北农业大学动科院（071001） 笔者于2002年6月20日—7月8日和2004年3月19日—4月7日分别陪同省长钮茂生、省委书记白克明率领的河北省经贸代表团两次赴澳、新、韩三国访问。 2004年4月—7月先后接待了澳大利亚SPB的总经理刘永树先生、法国Salers（萨来尔）牛协会主席和阿根廷胚移专家Carlos Munar（卡罗斯·莫纳）到河北的来访，就牛胚胎移植相关问题进行了交流，现将上述几个国家有关牛胚胎移植应用情况归纳如下： 一、体内胚胎生产（超数排卵）与胚胎移植情况 （一）阿根廷莫纳胚胎移植公司 1．超排方法： 0天放入第一个CIDR+肌注P4（50mg）+肌注BE（2mg）；第7天撤掉第1个CIDR，放入第2个CIDR+肌注P4（50mg）+肌注BE（2mg）；第11天注FSH，早，晚各1次；第12天注FSH，早，晚各1次；第13天注FSH，早，晚各1次；第14天注FSH，早，晚各1次，并且早晨撤掉第2个CIDR，早，晚各注PG1次；第15天早注FSH1次；第16天—17天发情，AI；第23—24天采胚 二、用屠宰场母牛卵巢卵母细胞体外生产胚胎 据新西兰的海青兰讲，他们和新西兰皇家农科院合作，每周可生产胚胎1000枚，每年生产5万枚左右。 三、澳大利亚SPB采用活体采卵（OPU）、体外受精（IVF）和胚胎移植（ET）对牛进行集中繁殖 通过使用活体采卵（超声导向和阴道探头（TVR））、体外受精、胚胎移植三项技术对成熟供体进行胚胎生产和移植。 SPB采用OPU—IVF—ET对牛进行集中繁殖生产主要包括以下八个步骤： 1、健康检查，2、供体牛选择，3、卵子收集，4、体外受精和胚胎生产，5、受体牛选择与同情发情处理，6、胚胎的移植，7、妊娠诊断，8、接产与产犊。 SPB公司采用活体采卵每年生产1万枚胚胎左右。 第一步 健康检查 供体母牛必须身体健康，生殖系统良好，先前做过MOET的母牛或具有生殖疾病的母牛被列为“劣质牛”，因为这样的母牛不能高效而准确地生产胚胎。先前做过MOET的母牛可能由于操作或激素的原因造成粘连或卵巢囊肿、卵巢静止等。 第二步 供体牛选择 1、适宜活体采卵母牛的生理时期 （1）14月龄以上发情周期正常的青年牛和成年母牛。 （2）分娩后恢复发情周期的泌乳母牛，且未在产乳高峰期的母牛。 （3）干奶期的母牛。SPB（南太平洋生物技术有限公司）认为，干奶期的母牛是最好的供体选择。 （4）人工授精后3—4周未出现返情的母牛或怀孕3个月以上的母牛。 供体牛群 供体牛群 第三步 卵子收集 1、活体采卵基本方法 （1）先将母牛麻醉，并且使母牛保持站立姿势。（2）将超声波探头插入阴道，探头会将信号传输到荧屏幕上，从而在荧幕上出现卵巢和卵泡的形态与位置，这种阴道探头有一个19 G的细针，该细针通过硅管与真空泵相连，细针可以直接插入卵泡，将卵子吸入到收集管中。 2、活体采卵间隔时间及水平。 母牛每周采卵1-2次。可间隔3-4天进行连续的采卵，对于正常母牛，无须进行激素刺激；但是当母牛采卵数少于7个时，可用外源激素进行适当调节。通常的做法是每14天做一次外源激素刺激；每收集一次卵子，可培养发育1.5-2.0个A、B级胚胎，这样一周采集2次，可获3.0-4.0个优质胚胎。 SPB每年每头牛可获胚胎约160枚。 3、影响活体采卵的因素及采卵效率。 （1）对于有过生殖疾病的母牛或做过MOET的母牛，即使现在它们的生殖系统健康，不能期望高于平均值；（2）老年母牛采卵数少，并且质量很差；（3）泌乳期的母牛，尤其在泌乳高峰期，采卵数会很低；（4）营养状况十分重要，母牛处于能量与营养平衡时会生产更多、更优的胚胎，但母牛不能过于肥胖。 专门的活体采卵人员可以在6个小时采集25头左右。 第四步 体外受精与胚胎生产 1、精液品质鉴定： 用于体外受精的精液要进行品质鉴定。先用提前鉴定的公牛精液与从屠宰场收集的卵子进行实验。用这种方法来判断精液是否可以成功受精，是否可以产生优良胚胎。这一步非常重要，因为人工授精良好的公牛精液不一定在体外受精时也表现良好。通常，一个人工授精剂量的精液可以受精200个卵子。 2、卵母细胞成熟、精子获能、受精与早期胚胎培养 收集的卵子检出后放进培养液并送到实验室进行体外受精，受精后需培养7天。受精液、培养液均为SPB自己配制。 3、体外受精与胚胎发育有关指标 用OPU的采卵数，世界平均水平（非激素处理），每头母牛可以一次采得5—8枚卵子。但是，即使大多数卵子都受精，也只有25%—30%的