油菜蜂花粉中粗蛋白的分离.pdfVIP

中困养蜂学会蜜蜂产品专qk委员会第七次学术研讨会会议论文 2006．1l北京 油菜蜂花粉中粗蛋白的分离 董 捷+孙丽萍朱晓丽 (中国农业科学院蜜蜂研究所，北京10093) 摘要：蜂花粉中的含氮量相当丰富，其中油菜蜂花粉中总含氮量在30％左右，其中游离态的氮含量为3．3％左 右。但足蜂花粉中的蛋白质种类比较复杂，仅靠单一的溶剂很难将其中的蛋白提取完全，本文利用不问的溶剂在 不同的条件下对油菜蜂花粉蛋白进行提取，将花粉蛋白分为水溶性、盐溶性、醇溶性、碱溶性和难溶性蛋白，并 计算它们在蜂花粉中各自的含量。 关键词：油菜蜂花粉；水溶性蛋白；盐溶性蛋白；醇溶性蛋白；碱溶性蛋白；难溶性蛋白 蜂花粉是自然界中存在的营养最丰富的一种食品，并且营养成分搭配合理，有利于人体吸收， 另外它还含有许多功能冈子，能够加强人体的免疫系统和生理功能，已经日益受到人们的青睐H】。 蜂花粉中蛋白质含量相当丰富，约占其干重的7％～35％亿31，氨基酸占总量的20％以上，游离氨 基酸1％～2％【4’5】，但是蜂花粉中所含蛋白质的种类比较复杂，单一溶剂并不能将其中大多数的蛋 白质分离出来。本文采用不同的溶剂对油菜花粉(Brassica campestris)蛋白进行提取，对花粉蛋 白的种类进行了初步的分离和研究。 1材料和方法 1．1材料 油菜破壁花粉(本实验室自备)：研钵；仪表恒温水浴锅；精密PH计购于梅特勒．托利多仪 器(上海)有限公司；冷冻干燥机，北京松源华兴科技有限公司；真空干燥箱，上海一恒科技有 限公司；低速大容量离心机，上海安亭科技仪器厂；半微鼍凯氏定氮仪；考马斯亮蓝G．250购于 天津市科密欧化学试剂开发中心；牛血清白蛋白购于北京奥博星生物技术有限公司；其他试剂均 为分析纯。 1．2方法 1．2．1粗蛋白分离 水溶性蛋白的分离：称取一定量的破肇花粉样品于研钵中，加少量的蒸馏水，研磨成匀浆。 将研磨好的材料转移到离心管中。用蒸馏水冲洗研钵，并入离心管。用玻棒搅拌离心管中的材料。 用数滴水向下淋洗玻棒，离心，上清液转入50ml容量瓶。向离心管的沉淀中再加少量蒸馏水， 搅拌5分钟，离心，上清液并入容量瓶。重复操作3次，最后加水定容至 50ml。 盐溶性蛋白的分离：向离心管中的残渣内加入10m110％的NaCI溶液，用玻棒搅拌5分钟， 然后以盐溶液冲洗玻棒，离心。上清液转入50ml容量瓶。用同一盐液洗提3次，离心上清液并 ‘董捷，女，副研究员，主要从事蜂产品的开发与利用研究。E-mail：iiedong@126．eom 23 中冈养蜂学会蜜蜂产品专qk委f，3会第七次学术研讨会会议论文 2006．11北京 入容量瓶，定容至50ml。 醇溶性蛋白的分离：向上述盐液提取后的残留物中加入10m175％乙醇，用玻棒搅拌，将混 合液置80℃的水浴中5分钟，在此期间要随时搅拌。其后取出离心管，继续搅拌5分钟，离心， 收集上清液。用75％乙醇洗提3次，合并离心上清液，并以75％乙醇定容至50ml。 m10．2％NaOH，用玻棒搅拌15分 碱溶性蛋白的分离：向上述醇液提取后的残留物中加入10 钟，离心，收集上清液。再用0．2％NaOH洗提3次(后面2次搅拌5分钟)。合并离心上清液， 以0．2％NaOH定容至50ml。 将以上收集上清和残渣用j卜微量凯氏定氮仪进行定量测定。 1．2．2粗蛋白的纯化 提取的蛋白质溶液分别采用离心、透析和冻干等方法，将蜂花粉蛋白分离制备为水溶蛋白、 醇溶蚩白、盐溶蛋白、碱溶蛋白等样品，供活性测定用。 花粉水提液盐析沉淀，对沉淀物进行透析后，冷冻干燥得水溶蛋白提取物。 花粉醇提液进行浓缩、透析和冷冻干燥得到醇溶蛋向提取物。 花粉盐提液进行透析，冷冻干燥得盐溶蛋白提取物 花粉碱提液调PH沉淀，对沉淀物进行透析后，冷冻干燥得碱溶蛋白提取物。 2结果和分析 根据蛋白质在不同溶剂中溶解度不同的性质，可将蜂花粉蛋白分为水溶蛋白、盐溶蛋白、醇 溶蛋白、碱溶蛋白等。表1表示的是蜂花粉中各