选3.2.2.1动物细胞培养和核移植技术.ppt

2.2 动物细胞工程 动物细胞工程 技术手段： 基础： 动物细胞培养、 动物细胞核移植、 动物细胞融合、 单克隆抗体 动物细胞培养技术是其他 动物细胞工程技术的基础 动物细胞培养 1、概念： 2、原理： 3、目的： 从动物机体中取出相关的组织或器官，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖 动物细胞培养 移植修复 细胞增殖(有丝分裂) 获得细胞或细胞产物 4、动物细胞培养过程： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 单个细胞 加培养液 1、P50 “思考与探究”1 思考：幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低的与分化 程度高的组织细胞比较，哪一种更易于培养？ 提示： 细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细 胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能 力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。所以，一般来 说，幼年动物的组织细胞比老年动物的易于培养。 同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力 越强，所以更容易培养。 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们的细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养。 动物胚胎或幼龄动物的组织器官 单个细胞 分散 原因： 目的： 方法： 2.为什么要将细胞分散后，细胞才能生长增殖？从物质交换的角 度分析，细胞分散后，有什么优点？ 接触抑制 (细胞与细胞紧靠在一起，限制 了细胞的生长和增殖) 便于细胞与外界溶液进行充分的物质交换 (易于吸收营养，排除代谢废物) 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 5、细胞株：培养细胞一般传至10—50代左右时，生长 停滞，大部分细胞衰老死亡(核型正常)， 这种传代细胞为细胞株 细胞系：细胞传至50代后，有部分细胞由于遗传 物质(核型)的改变，使其在培养条件下可以 无限制传代，这种传代细胞为细胞系 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质(细胞核型)改变， 具有癌细胞的特点(不死性)，失去接触 抑制，容易传代培养 4、动物细胞培养过程： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 单个细胞 加培养液 动物细胞的培养过程 幼龄动物 取动物器官 和组织 剪碎组织 胰蛋白酶处理 细胞培养 单个细胞 5.细胞在培养瓶中生长具有哪些特点？ 细胞悬液 原代培养(初次装瓶培养) 培养瓶中培养—细胞生长特点 贴壁生长 含义： 要求： 细胞要能贴附于底物上才能增殖 培养瓶或培养皿内表面光滑、无毒、易贴附 接触抑制 传代培养(分瓶继续培养) 胰蛋白酶处理贴壁细胞，分散成单个细胞，制成细胞悬液 接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 50代以后 失去接触抑制 接触抑制 动物细胞生长特性 部分细胞突变，获得不死性，向癌细胞方向发展，糖蛋白减少。 6.分散的单个细胞要用什么状态的培养基来培养，你认为培养基 中应加入哪些物质？ 单个细胞 细胞悬液 培养基 作用： 状态： 成分 液体培养基 营养物质 为细胞提供营养 无机物： 有机物： 水、无机盐 氨基酸、糖类、促生长因子等 血清、血浆 合成培养基+血清、血浆=半合成培养基 1、无菌、无毒的环境 动物细胞培养的条件 培养液和培养器具—无菌处理 培养液中添加抗生素—目的：防止培养过程中杂菌污染 定期更换培养液—目的：清除代谢产物，防止细胞代谢积累 对细胞造成伤害 2、营养：合成培养基+血清、血浆 3、温度和PH： 36.5+0.5℃, 7.2-7.4 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 混合气体培养箱） O2是细胞代谢所必需的 CO2维持培养液的PH 过程： 植物组织培养 动物细胞培养 外植体 脱分化 愈伤组织 再分化 胚状体/丛芽 移栽 试管苗 植株 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 原代培养 传代培养 单个细胞 加培养液 胰蛋白酶 应用： 快速繁殖、作物脱毒等 生产生物制品、检测毒性等 细胞的全能性 培养瓶 锥形瓶 培养器皿 获得细胞或细胞产物 获得完整个体或细胞产物 培