生化课件DNA的生物合成.pptVIP

真核生物复制子多、冈崎片段短、复制叉前进速度慢等； DNA复制从引发进入延伸阶段发生DNA聚合酶?/?转换； 真核生物与原核生物DNA复制的差异： 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 复制的起始需要DNA-pol α（引物酶活性）和pol δ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 一、真核生物复制的起始与原核基本相似 DNA-pol δ和pol α分别兼有解螺旋酶和引物酶活性。在复制叉及引物生成后，DNA-pol δ通过PCNA的协同作用，逐步取代pol α，在RNA引物的3?-OH基础上连续合成领头链。随从链引物也由pol α催化合成。然后由PCNA协同，pol δ置换pol α，继续合成DNA子链。 二、真核生物复制的延长发生DNA聚合酶α/δ转换 前导链：出现在引发后期 后随链：发生于每个冈崎片段合成之际 发生DNA聚合酶?/?转换的原因是Pol ?不具备持续合成能力。 DNA聚合酶?/?转换的关键蛋白是RFC。 DNA聚合酶?/?转换 3? 5? 5? 3? 领头链 3? 5? 3? 5? 亲代DNA 后随链 引物 核小体 三、真核生物DNA合成后立即组装成核小体 染色体DNA呈线状，复制在末端停止。 复制中岡崎片段的连接，复制子之间的连接。 染色体两端DNA子链上最后复制的RNA引物，去除后留下空隙。 四、端粒酶参与解决染色体末端复制问题 5? 3? 3? 5? 5? 3? 3? 5? + 5? 3? 3? 3? 3? 5? 5? 端粒（telomeres）由富含TG的重复序列组成。 人的端粒重复序列为5’-(TnGn)x-3?。 这些重复序列多为双链，但每个染色体的3’端比5?端长，形成单链ssDNA。这一特殊结构可解决染色体末端复制问题。 端粒酶(telomerase) 端粒酶RNA (human telomerase RNA, hTR) 端粒酶协同蛋白(human telomerase associated protein 1, hTP1) 端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTRT) 组成： 端粒酶（telomerase）是一种核糖核蛋白（RNP），由RNA和蛋白质组成。 端粒酶以自己的RNA组分作为模板，以染色体的3?端ssDNA（后随链模板）为引物，将端粒序列添加于染色体的3?端。这些新合成的DNA为单链。 端粒酶催化作用的爬行模型 逆转录和其他复制方式 Reverse Transcription Other DNA Replication Ways 第五节 双链DNA是大多数生物的遗传物质。某些病毒的遗传物质是RNA。原核生物的质粒，真核生物的线粒体DNA，都是染色体外存在的DNA。这些非染色体基因组，采用特殊的方式进行复制。 逆转录酶(reverse transcriptase) 逆转录(reverse transcription) 逆转录酶 一、逆转录病毒的基因组RNA以逆转录机制复制 RNA DNA 逆转录病毒细胞内的逆转录现象: RNA 模板 逆转录酶 DNA-RNA 杂化双链 RNA酶 单链DNA 逆转录酶 双链DNA 二、逆转录的发现发展了中心法则 逆转录酶和逆转录现象，是分子生物学研究中的重大发现。 逆转录现象说明：至少在某些生物，RNA同样兼有遗传信息传代与表达功能。 dNTP DNA-pol γ D环复制(D-loop replication) 是线粒体DNA (mitochondrial DNA，mtDNA)的复制形式。 三、真核生物线粒体DNA按D环方式复制 D-环复制时需合成引物。mtDNA为双链，第一个引物以内环为模板延伸。至第二个复制起始点时，又合成另一个反向引物，以外环为模板进行反向的延伸。最后完成两个双链环状DNA的复制。复制中呈字母D形状而得名。 D环复制的特点是复制起始点不在双链DNA同一位点，内、外环复制有时序差别。 遵守严格的碱基配对规律； 聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能； 复制出错时有即时校对功能。 DNA复制的保真性至少要依赖三种机制： （一）复制的保真性依赖正确的碱基选择 利用“错配”实验发现，DNA pol Ⅲ对核苷酸的参入（incorporation）具有选择功能。 DNA pol Ⅲ对嘌呤的不同构型表现不同亲和力，因此实现其选择功能。 （二）聚合酶中的核酸外切酶活性在复制中辨认切除错配碱基并加以校正 核酸外切酶(exonuclease)是指能从核酸链的末端把核苷酸依次水解出来的酶，外切酶是有方向性的。