生物农药生物农药课程讲稿22章节.ppt

微生物农药 二、微生物农药的研制技术路线 技术路线 4.发酵及后处理工艺研究 ? 样品制备 ? 田间药效的进一步试验 5.毒理学、环境生态试验 6. 中试生产工艺开发 7. 正规药效试验 ? 大田试验示范 8. 农药登记?生产许可证 ? 产业化和商品化 双层培养基法HY96-2对青枯病菌（R.solanacearum）的抑制率 2、生物筛选--温室盆栽 HY96-2(W1-2)对番茄的促生长效果 3、生防菌株的鉴定 生理生化 （1）革兰氏染色结果表明，HY96-2菌株为革兰氏阳性兼有阴性，抗酸染色呈阴性。 （2）形态特征：于32℃培养2天后，HY96-2菌株的菌体为直或近直的杆状，在一个略膨大的孢囊内只含有一个椭圆形芽孢，并具有稀疏的周生鞭毛，能运动；好氧生长，兼性厌氧，在营养琼脂上无可溶性色素。 （3）细胞壁化学分析：HY96-2菌株含有meso-DAP(二氨基庚二酸)甘氨酸、无特征性糖，细胞壁Ⅱ型。 （4）培养特征： 分子生物学 ?16S rDNA序列分析：16S rDNA序列分析结果表明，HY96-2菌株属于类芽孢杆菌属(Paenibacillus)。HY96-2菌株与多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)序列同源性为99%。 根据16S rDNA的序列分析结果，HY96-2菌株属于类芽孢杆菌属；HY96-2菌株革兰氏染色阳性兼有阴性，不抗酸，细胞呈杆状，形成芽孢，并有鞭毛，在一个孢子囊中只产生一个孢子，属于类芽孢杆菌属(Paenibacillus)。HY96-2菌株的各项培养特征和生理生化特征均与多粘类芽孢杆菌相同。 所以将HY96-2菌株鉴定为－－ 多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) 4、生防菌株致病性检测 致病性试验： 在雄性、雌性小鼠经腹腔注射500mg/kg后，未引起小鼠死亡，属无致病性。 5、菌株生防机制研究 抑菌活性物质 诱导抗病性 定殖能力 抑菌活性物质 抑菌活性物质 HY96-2对β-1，3-葡聚糖酶活性的影响 HY96-2处理番茄后根系 HY96-2处理番茄后茎部 β-1,3-葡聚糖酶活性变化 β-1,3-葡聚糖酶活性变化 HY96-2对苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性的影响 HY96-2处理番茄后根系PAL活性变化 HY96-2处理番茄后茎部PAL活性变化 定殖能力 Nb-1K的定殖 HY96-2K存在时Nb-1K的定殖 定殖能力 HY96-2K的定殖 定殖能力 Nb-1K存在时HY96-2K的定殖 定殖能力 扫描电境观察HY96-2在番茄植株上的分布 定殖能力 扫描电境观察HY96-2在番茄植株上的分布 扫描电境观察HY96-2在番茄植株上的分布 扫描电境观察HY96-2在番茄植株上的分布 6、发酵工艺及放大技术的研究 5L发酵罐 50L发酵罐 500L发酵罐 3吨发酵罐 3吨发酵罐灭菌操作 摇床 7、剂型的研究 水剂 粉剂 粒剂 原粉剂 可湿性粉剂 乳剂 油剂 油悬剂 微胶囊剂 干菌丝剂 0.1亿cfu/g多粘类芽孢杆菌细粒剂的生产工艺 散装样品 江西－－“二年四地”田间药效试验  湖南－－“二年四地”田间药效试验 广东－－“二年四地”田间药效试验 福建－－“二年四地”田间药效试验 番茄青枯病空白对照 番茄农用链霉素 康地蕾得2000克 康地蕾得2500克 辣椒试验田 辣椒青枯病对照组 辣椒农用链霉素对照组 康地蕾得每亩2公斤用药组 CK HY96-2（3天） HY96-2（10天） 茎表皮 CK HY96-2（10天） 茎部韧皮部 CK HY96-2（10天） CK HY96-2（10天） 茎部木质部 茎部髓 定殖能力 叶 CK HY96-2（10天） 从扫描电境照片结果可知，HY96-2能在番茄的主根表皮、须根表皮、茎表皮、木质部、韧皮部、髓和