高级生物化学-3 PPT.ppt

;第三章 酶的作用原理;第三章 酶的作用原理;酶的催化活性与其一级结构密切相关，如果酶活性中心的氨基酸组成和结构发生改变，酶的活性也发生改变。酶的活性与其高级结构也有密切关系，如果酶的高级结构发生改变，则酶的活性亦发生改变。; ;酶和底物分子都有三维空间结构，按照这一理论，酶的活性中心与底物分子的空间结构必须十分吻合，所以这一假说可以解释某些酶的立体异构专一性和酶的竞争性抑制作用，但却不能解释一个酶可以与几个底物结合的现象和酶催化的可逆反应等问题。; 二、“诱导楔合”假说;底物和酶相互作用的诱导契合学说;第二节 酶促反应的本质和机制;催化基团的精确位置对酶促反应甚为重要，当酶蛋白变性时，使这些基团在空间的排列状态受到破坏，酶因而失去活性。 酶催化反应的高效率是由几种不同的效应引起的，现已观察到在酶促反应中至少有五种不同的效应。;一、“张力”效应;酶与底物结合后产生的张力效应如何使底物激活的问题，可借助于非酶促反应的例子来理解。如二甲基磷酸和乙烯磷酸的水解反应： 乙烯磷酸可以看作二甲基磷酸的环状类似物，由于二甲基之间形成了共价键，影响了C—O键的电子云密度，使其产生了张力，变得更为敏感，因而易于断裂。它的水解速度较二甲基磷酸的水解速度快108倍。;二、底物与酶的“靠近”及“定向”效应;有人曾测过某底物在溶液中的浓度为0.001mol/L，而在其酶的活性中心的浓度竟达到了100mol/L，比溶液中的浓度高十万倍，这可能是酶活性中心与底物具有很高亲合力的原因。因此，可以想象，在酶活性中心区域反应速度必定是很高的。这就是酶和底物的“靠近”效应。;酶与底物的这种靠近“效应”对提高反应速度的作用可以用一个著名的有机化学实验来说明。如下表所示：双羧酸苯酯在分子内催化过程中，自由羧基作为催化剂起作用，而连有R基的酯键则作为底物，受—COO-的催化断裂成环而形成酸酐，催化基团—COO-越靠近酯键则反应速度越快，在最近的情况下，反应速度可增加53000倍。;但仅仅“靠近”还不够，还需要使反应基团和催化基团彼此严格地“定向”，只有既“靠近”又“定向”，反应物分子才被作用，迅速形成过渡态，从而加速了反应的进行。;当底物未与酶结合时，活性中心的催化基团还未能与底物十分靠近，但由于酶活性中心有一定的适应性，即当专一性底物与活性中心结合时，酶蛋白会发生一定的构象变化，使活性中心的结合基团与催化基团正确地排列并定位，以便能与底物楔合，使底物分子得以靠近并定向于酶。这就是“诱导楔合”假说。;只有这样才能使酶活性中心的底物浓度大大提高，酶促反应速度才能大大加快。所以，酶构象发生的这种变化是反应速度增大的一个重要原因。反应后释放出产物，酶的构象再逆转，回到它的初始状态。对溶菌酶及羧肽酶进行的X-射线衍射分析的实验结果已经证实了上述看法。Jenck等人指出：“靠近”及“定向”效应可能使反应速度增加108倍，这与很多酶的催化效率很相近。;三、共价催化;共价催化可以提高反应速度的原因需要从有机模式的某些原理说起。共价催化最一般的形式是催化剂的亲核基团对底物中亲电子的碳原子进行攻击。亲核基团含有多电子原子，可以提供电子，所以是十分有效的催化剂。亲核基团作为强有力的催化剂提高反应速度的作用原理可以从亲核基团催化酰基转移的反应中看出。;亲核基团催化的反应;第一步反应中亲核基团（催化剂Y）攻击含有酰基的分子，形成了带有亲核基团的酰基衍生物，这种酰基衍生物作为一个中间物再起作用；第二步反应中将酰基从亲核催化剂上转移到最终的酰基受体上，这种受体分子可能是水或某些醇。由于反应中有催化剂参加，而且催化剂是易变的亲核基团，所以两步催化的总速度要比非催化反应大得多。因此，形成不稳定的共价中间物可以大大加速反应。;酶分子上强有力的亲核基团很多，可以进行共价催化。酶蛋白分子上至少有三种亲核基团，即丝氨酸的羟基、半胱氨酸的巯基及组氨酸的咪唑基。 此外，辅酶中还有另外一些亲核中心。 共价结合也要以被亲电子基团所催化，最典型的亲电子基团是H+、Mg2+、Mn2+及Fe3+等。 ;四、酸碱催化;例如，羰基上的加水反应、羧基酯及磷酸酯的水解反应、双键上的脱水反应、各种分子的重排反应以及许多取代反应都是广义的酸碱催化反应。 酶蛋白中含有好几种可以起广义酸碱催化作用的功能基，如氨基、羧基、硫氢基、酚羟基及咪唑基等。其中组氨酸上的咪唑基值得特别注意，因为它既是一个很强的亲核基团，又是有效的广义酸碱功能基。;影响酸碱催化反应速度的因素有两个： 一是酸碱的强度。在这些功能基中，组氨酸咪唑基的解离常数约为6.0，这意味着从咪唑基上解离下来的质子浓度与水中的[H+]相近，因此它在接近生物体液pH的条件下（即中性），有一半以酸的形式存在，另一半以碱的形式存在。也就是说咪唑基既可作为质子供体，又可作为质子受体在