氨基酸螯合锌和维生素E互作对肉仔鸡生长、免疫和抗氧化功能的影响-开题报告PPT.pptVIP

欢迎大家参加;氨基酸螯合锌和维生素E互作对肉仔鸡生长、免疫和抗氧化功能的影响  ;一、论文选题意义  1、科学和实践意义 2、国内外研究动态  3、创新和特色 ;;2 国内外研究动态VE对生长、免疫抗氧化功能的研究进展;3 创新和特色 ;二、研究内容、预期达到的目标及拟解决 的关键问题 1、研究内容及预期达到的目标 2、拟解决的关键问题 ;1 研究内容及预期达到的目标;2 拟解决的关键问题;三、研究方法和技术路线 1. 拟采取的研究实验方法、步骤、技术路线及可行性论证 2. 研究工作的总体安排及进度; 1. 拟采取的研究实验方法、步骤、技术路线及可行性论证 1.1 实验方法及实验设计 1.2 饲养管理 1.3 测定指标及方法 1.4 实验步骤 1.5技术路线及可行性论证 ;;表1试验设计;1.2 饲养管理 试验鸡，按照该品种鸡管理手册管理。保证自由采食与饮水。 1.3 测定指标及方法 （1）生长性能有关指标：各重复组分别在3、5、6和7周龄末测定两阶段鸡体重，统计耗料量，和各组鸡死亡数，计算增重、料肉比。 （2）T淋巴细胞百分数：采用α-醋酸萘酯染色法[1] 。 （3）免疫器官指数（g/kg）=免疫器官鲜重/体重 ;（4） 淋巴细胞转化率：采用淋巴细胞转化实验[2]。 （5）NDV抗体效价：采用酶联免疫吸附试验[3]测定。 （6）血清铜锌超氧化物歧化酶（Cu,ZnSOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）血清铜蓝蛋白(CP) 和血清丙二醛（MDA）都由南京建成生物工程研究所提供的试剂盒测定。 （7）组织器官锌浓度 组织器官锌浓度：准确称取烘干粉碎后样品2.0000克于30毫升坩埚中，在电炉上炭化至无烟，冷却，然后置于500-550℃高温电炉中灰化8小时，冷却后，加1mol/L的硝酸2ml35℃烘箱过夜，再转移到50ml容量瓶中，定容，用原子吸收分光光度计测定。;1.4实验步骤 试验期49天。分两个阶段，第一阶段为0~3周龄，第二阶段为4~7周龄。分别在7、14日龄接种NDV疫苗，并检测相应抗体效价。 1.4.1样品的采集和制备 分别在3、5、6、7w末采集（公母比例相同）血样。从每个重复内随机抽取接近平均体重的鸡各两只，心脏采血。制备全血和血清。最后一次采血并称重后，将鸡屠宰，去毛，称屠体重，然后将法氏囊、胸腺、脾脏分别称重。 1.4.2 数据统计分析 试验所有数据均采用SAS统计软件中（ANOVA）进行方差分析，多重比较用邓肯氏法(DUNCAN)。 1.5技术路线及可行性论证 ; ;2、研究工作的总体安排及进度 2005.7～2006.3 搜集并整理资料，准备试验的前期工作； 2006.4～2007.1 操作饲养试验，并检测各项指标； 2007.2～2007.5 统计分析试验数据，总结试验结果并撰写论文;;谢谢大家;[1] α一醋酸萘酯染色法 1、基本原理： T淋巴细胞的胞浆内存在着酸性α一醋酸萘酯酶，在弱酸性条件下，能使底物醋酸萘酯水解，产生醋酸离子和α一萘酚。其中α一萘酚与六偶氮副品红偶连，生成不溶性的红色沉淀物，沉积在T淋巴细胞胞浆内酯酶所在的部位。经甲基绿复染后，反应颗粒变暗而呈深紫红色。 2、所需试剂 4%副品红盐酸溶液；4%亚硝酸钠水溶液(现用现配)；2%α一乙酸萘酯乙二醇甲醚溶液(现用现配)；福尔马林一丙酮固定液；PH7.6磷酸盐缓冲液(PBS)；0.5%孔雀绿染色液；孵育液配制(现用现配)。 3、操作步骤 静脉取血，载玻片上涂血片2张，晾干，将血片置冷的福尔马林一丙酮固定液中，4℃下固定lmin。取出血片用???来水冲洗3min，用蒸馏水冲掉自来水，室温干燥；将血片放入孵育液中，37℃孵育1.5hr，取出血片，水洗3min，用双馏水冲去沉淀物，孔雀绿染色液复染lmin，自来水和双馏水先后冲洗，晾干，油镜观察，计数100个淋巴细胞，求出ANAE阳性细胞百分比。 ; ;[3]酶联免疫吸附方法 一、主要仪器 酶联免疫检测仪(Bio－550) 酶标板 (96孔) 微量注射器。 二、主要试剂 HRP标记羊抗兔Ig G(1:1 000，国产)；标准牛IgG；兔抗牛血清（1：32）； 碳酸盐一重碳酸盐缓冲液(pH= 9.6)；柠檬酸盐缓冲液(pH =4.0)； 磷酸盐缓冲液PBS ；ELISA缓冲液：PBS + 1 % BSA ；清洗液：PBS+0 .05%Tween 20；底物溶液贮液为20 mg/ml ABTS，使用时用柠檬酸盐缓冲液稀释20倍，再用等体积的0.3%H2O稀释；终止液。 三、操作步骤 1. 包被