诱导型一氧化氮合酶在酒精性肝病大鼠模型肝脏中的表达及意义.pdfVIP

中文摘要 诱导型一氧化氮合酶在酒精性肝病大鼠模型 肝脏中的表达及意义 摘 要 liver 目的：酒精性肝病(alcoholic 大量饮酒所致的肝脏损害性病变，其病理改变包括酒精性脂 肪肝、酒精性脂肪性肝炎、酒精性肝纤维化及酒精性肝硬化。 关于ALD的发病机理目前尚不清楚，近年来有人提出以氧 化应激和脂质过氧化为中心的“二次打击”假说，“第一次 打击使脂类沉积在肝细胞，导致脂肪肝，“第二次打击” 涉及内毒素、细胞因子参与的氧化应激和脂质过氧化。一氧 oxide 化氮合酶(nitric oxide，NO)的一种关键酶，目前发现至少有3种亚型，分别 为诱导型一氧化氮合酶(inducibleNOS，iNOS)，内皮型一氧 化氮合酶(endothelial NOS，eNOS)和神经元型～氧化氮合 酶(neuronalNOS，nNOS)。其中与肝脏疾病有关的主要为 iNOS和eNOS。在生理状态下，肝组织中主要表达eNOS， 而iNOS无表达或仅有较少表达。当肝组织受损时，肝细胞 则大量表达iNOS，催化产生大量的N0。N0在大量活性 anion，02)快 氧存在的条件下，与超氧阴离子(superoxide 从而影响细胞的能量和脂质代谢以及细胞的增殖、分化与凋 亡。本研究旨在应用酒精灌胃建立大鼠ALD模型，用免疫 组织化学染色及逆转录聚合酶链反应(1‘everse transcription． 中文摘要 chain polymerase 及iNOS 表达及意义，为有效防治ALD提供新的思路。 方法：选用雄性健康清洁级Wister大鼠50只，体重 200土209，正常饲养l周后随机分出lO只为正常对照组，其 余动物采用逐渐增加酒精浓度(浓度30％．60％，乙醇 16周末随机处死动物8只、8只、8只和9只，留取血清及 AU 肝组织标本并制备10％的肝匀浆，应用日本OLYMPUS CHE)；应用比色法检测肝匀浆肝组织蛋白含量，以g(mg) free 基(oxygen MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide 含量；取部分肝组织立即冰冻切片行苏丹Ⅳ染色，观察肝细 胞脂肪变性情况；另取肝组织固定于4％中性福尔马林溶液， 染色观察肝组织的普通病理改变，天狼红染色观察肝组织纤 维化程度；并用石蜡切片进行iNOS、NT免疫组织化学染色， 观察肝组织iNOS、NT的表达情况；余肝组织经液氮速冻后 mRNA的 置于．80℃冰箱，用RT-PCR观察大鼠册纰织iNOS 表达。 结果： 1血清生化指标的变化：随着造模时间的延长，血清创』 中文摘要 和AST逐渐升高，CHE逐渐降低，与正常对照组比较P0．05 或P0．01。 2肝组织匀浆氧化应激指标的变化：随着造模时间的延长， 渐降低，与正常对照组比较P0．05或P0．01。 3肝组织病理学改变：4周大鼠肝细胞出现小叶中央静脉周 围肝细胞脂肪变性，随着造模时间的延长，肝细胞脂肪变性 逐渐加重，肝d,Rt内坏死灶明显增多和纤维组织增生，16周 大鼠肝细胞呈现弥漫微囊泡样脂肪变性，窦周纤维化，汇管 区纤维组织增生并有纤维间隔形成。冰冻切片苏丹Ⅳ染色显 示正常对照组大鼠肝组织无脂肪变性，模型4周组大鼠肝细 胞胞浆中出现少量红色脂滴，随着造模时间延长，红色脂滴 逐渐增多，至16周表现为大量红色脂滴分布于肝细胞内。 天狼红染色显示模型4周组大鼠肝组织无明显纤维组织增 生，模型12周组大鼠肝组织出现明显窦周纤维化和纤维化 间隔形成趋势，