蜂胶总黄酮对大鼠急性放射性肠损伤的保护作用及对P38MAPK途径的影响.docVIP

精品论文 参考文献 蜂胶总黄酮对大鼠急性放射性肠损伤的保护作用及对P38MAPK途径的影响 余磊1 唐巧云1 楚建军2 　　(1江苏大学附属人民医院肿瘤科 210029) 　　(2无锡市第四人民医院肿瘤科 214062） 　　【摘要】目的：研究蜂胶总黄酮对大鼠肠道放射损伤的保护作用以及对P38丝裂原活化蛋白激酶途径的影响。方法：50只大鼠随机分为5组：正常对照组，模型组，总黄酮高低剂量组（200ml/kg/d，100/kg/d），N-乙酰半胱氨酸组，除正常对照组外其余各组给药后第4天予6MV X线单次腹部照射9Gy，照射后3d处死大鼠取材，原位末端标记法检测肠黏膜凋亡，酶联免疫吸附法（ELISA）测定TNF-alpha;含量，蛋白印迹法检测P38MAPK的表达情况。结果：模型建立成功：模型组TUNEL法肠黏膜凋亡明显增多，P38MAPK活化和TNF-alpha;表达亦明显增加(Plt;0.05)；与单纯照射组相比，蜂胶总黄酮组肠黏膜凋亡减少及P38MAPK活化受到抑制，TNF-alpha;表达减少，差异有统计学意义（Plt;0.05）。结论：蜂胶总黄酮对大鼠急性放射性肠损伤有一定保护作用，其机制可能与一定程度抑制P38MAPK激活，减少TNF-alpha;表达有关。 　　【关键词】蜂胶总黄酮 放射性肠损伤 急性 细胞凋亡 P38丝裂原活化蛋白激酶 肿瘤坏死因子-alpha; 　　【中图分类号】R453 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）24-0092-02 　　盆腹腔肿瘤放疗的患者常易并发急性放射性肠损伤，一旦发生不仅极大限制了放疗正常进行，且严重影响患者生存率和生活质量，给患者带来极大痛苦。目前机制不完全清楚，尚无有效治疗措施。蜂胶具有抗炎，抗辐射，抗氧化，清除自由基的作用，其主要有效成分是总黄酮，有报道黄酮对缺血再灌注肠损伤有保护作用[1]，但在放射性肠损伤方面的研究报道较少。本文拟建立大鼠放射性肠损伤模型，通过总黄酮干预研究其保护作用以及相关机制，以期为临床防治放射性肠损伤提供新的策略和思路。 　　1.材料与方法 　　1.1试验动物及材料：健康清洁级成年雄性SD大鼠50只，体重220-260g，（江苏省无锡市血吸虫病防治研究所提供，动物合格证号：苏BKS2007-003），TNF-alpha;试剂盒（南京凯基生物科技有限公司产品），兔抗鼠总P38MAPK及磷酸化P38MAPK多克隆抗体（北京博奥森生物技术有限公司产品），N-乙酰半胱氨酸（美国sigma公司产品），-80℃冰箱（日本三洋MDF-382E），紫外分光光度计（美国Beckman公司），医用电子直线加速器(美国Varian2300CD23EX)。 　　1.2实验动物分组：将健康清洁级成年SD大鼠50只，在清洁动物房内用标准饲料适应性喂养3天，温度18～22℃，湿度50%，普通光照6：00—18：00，自由饮水，观察大鼠无不良反应，进食饮水活动正常。随机分为五组：C组 正常对照组（n=10）：未作腹部照射；R组 单纯照射组（n=10）：仅接受单次腹部照射。T1组 总黄酮高剂量组（n=10），灌服总黄酮200mg/kg/d连续7天+单次腹部照射。T2组 总黄酮低剂量组（n=10），灌服总黄酮100mg/kg/d连续7天+单次腹部照射。N组 NAC组设为阳性对照（n=10），灌服N-乙酰半胱氨酸200mg/kg/d连续7天+单次腹部照射。 　　1.3模型的建立及取材：给药后第4天，将实验大鼠（除对照组外）禁食12h，不禁水，逐一称重后用10%水合氯醛按3.5ml/kg腹腔注射麻醉，固定在特制有机玻璃板上，医用直线加速器予6MV X线单次腹部照射9GY，剂量率4.5GY/min，照射时间2min，照射范围为剑突至耻骨联合，照射面积8.5cm*5.5cm，源皮距（SSD）=100cm。照射完毕将大鼠放回笼内待其苏醒，自由活动及饮水。所有大鼠照射后第3天禁食12h处死动物取材。 　　1.4检测指标： 　　1.4.1原位末端标记法（TUNEL）观察细胞凋亡：取回肠组织中性甲醛固定，石蜡包埋，切片，脱蜡脱水，严格按照说明书操作，封片，置于荧光显微镜下观察凋亡细胞（绿色荧光颗粒为阳性细胞，即凋亡细胞），在高倍镜下（times;400）每张切片随机选取5个视野计算凋亡指数（apoptosis index，AI），AI=凋亡细胞/总细胞数times;100%，5个视野下的平均值代表每张切片的实际AI。 　　1.4.2酶联免疫吸附法（ELISA）测定TNF-alpha;含量：大鼠麻醉后用EDTA抗凝管心脏取血2ml，2000rpm离