坛紫菜叶状体体细胞对抗生素敏感性的研究.PDFVIP

第23 卷　第4 期 台　　湾　　海　　峡　 　　　　　　　　Vol.23, 　No.4 2004 年11 月 JO URNA L OF OCEANOGR AP HY IN TAIW AN STR AI T 　　　　　　Nov., 2004 坛紫菜叶状体体细胞对抗生素敏感性的研究 赵　扬, 李　秀, 正宏, 王　诚, 王重刚, 陈奕欣 (厦门大学生命科学学院、细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室, 福建 厦门　361005) 摘要:坛紫菜(Porp hyr a hait anens is )叶状体体细胞对氨苄青霉素有很强的耐受性, 但 氨苄青霉素对体细胞分裂、分化具有明显的抑制作用, 导致更多的体细胞分化形成细 胞团, 并能抑制叶状体假根的形成.坛紫菜叶状体体细胞对氯霉素敏感, 100μg/cm3 3 和800μg/cm 组的体细胞分别于培养的12、10d 全部死亡.本试验结果初步表明, 氯 霉素可作为坛紫菜基因工程的有效选择压力. 关键词:水产养殖;坛紫菜;氨苄青霉素;氯霉素;敏感性 + 中图分类号:S968.43 1　　　　文献标识码:A 文章编号:1000-8160(2004)04-0496-04 紫菜是经济价值很高的一种海藻.解放后, 我国紫菜养殖业得到迅速发展, 紫菜产量占全 [1, 2] 世界的1/4, 名列世界第三 , 但目前我国紫菜养殖业面临养殖品种退化和病害频发的局 [3] 面 .因此, 开展紫菜基因工程研究, 进而培育紫菜新品种是解决上述问题的重要途径之一. [4] [ 5] Kubler(1994) 和王素娟等(1994) 分别用pBI121/221(CaMV35S- US 基因)质粒载体, 电 击转化条斑紫菜(Porp hyra yez oe ns is )和坛紫菜原生质体, 均获得了 US 报告基因的瞬间表 达.但阳性选择标记的缺乏阻碍了进一步开展稳定遗传转化的研究. 目前, 植物基因工程的选择标记基因主要包括抗生素抗性基因和除草剂抗性基因等.李新 萍等(1999)、武建秋等(1999)对海带(L aminar ia j ap on ica )的研究表明, 氯霉素是海带基因工 [6, 7] 程的有效选择压力 .沈怀舜等(1999)和张亚萍等(2002)对条斑紫菜的研究表明, 氯霉素可 [ 8, 9] 作为条斑紫菜基因工程的有效选择压力, 而氨苄青霉素对条斑紫菜具有生长抑制作用 . 坛紫菜是福建、浙江和广东沿海的主要养殖品种.本实验通过分析坛紫菜叶状体体细胞对 氨苄青霉素和氯霉素的敏感性, 试图摸索出合适的选择压, 为下一步转基因植株的筛选确定阳 性选择标记基因. 1　材料和方法 1.1 　材料 坛紫菜(编号:NH), 野生型, 于2002 年10 月采自福建省平潭县, 日龄约40d, 阴干后于- 20℃保存备用. 1.2 　方法 收稿日期:2004-03-04 基金项目:国家863 计划资助项目(2002AA603023);福建省科学技术厅重大项目(2001Z017) 作者简介:赵扬(1971～ ), 男, 讲师, 在职博士研究生. 通讯作者:陈奕欣(1949～ ), 女, 教授. 　4 期　　　　　　　　赵　扬等:坛紫菜叶状体体细胞对抗生素敏感性的研究　　　　　　　　·　49　7 　·　 1.2.1　主要试剂　氨苄青霉素、氯霉素和1, 2 丙二醇等试剂购自上海华舜生物工程有限公 司、中国医药集团上海化学试剂公司.氨苄青霉素、氯霉素分别用双蒸水和 1, 2 丙二醇配制成 母液, 并用0.22μm 滤器过滤除菌, 于-20℃保存备用. 1.2.2　坛紫菜叶状体体细胞对抗生素的敏感性试验　坛紫菜叶状体部分酶解体细胞的制备、 培养方法参照文献[1