小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌的单孢检测-南京农业大学学报.PDFVIP

南京农业大学学报 　2003 , 26 (2) : 42～46 　 Journal of N anjin g A gricultural U niversity 小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌的单孢检测 易建平 , 陶庭典 , 印丽萍 , 沈禹飞 , 潘良文 , 郑建中 (上海出入境检验检疫局 , 上海 200135) 摘要 : 设计了小麦印度腥黑穗病菌 ( Tilletia indica) 和黑麦草腥黑穗病菌 ( Tilletia w alkeri ) 通用引物 H4/ H7 和 H11/ H12 , 结合 T . indica 特异性引物 Tin3/ Tin4 和 T . w alkeri 特异性引物 Tin11/ Tin4 建立了检测 T . indica 和 T . w alkeri 冬孢子的套式 PCR (nested PCR) 检测方法。检测的灵敏度达 1 个冬孢子 , 检测时间缩短为 8 h 。PCR 产物的测序验证了 PCR 反应的可靠性。这一方法克服了冬孢子休眠或不具存活力以及常规 PCR 检测时间长的困难 , 有效地解决了漏检问题。 关键词 : 小麦印度腥黑穗病菌 ; 黑麦草腥黑穗病菌 ; 套式 PCR ; 检测 中图分类号: S41 30 　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 1000 2030 (2003) 02 0042 05 Detection for single teliospore of Tilletia indica and Tilletia walkeri YI Jianping , TAO Tingdian , YIN Liping , SHEN Yufei , PAN Liangwen , ZHEN G Jianzhong ( Shanghai Export and Import Inspection and Quarantine Bureau , Shanghai 200135 , China) Abstract : A simple and practical nested PCR method using primers H4/ H7 , H11/ H12 , Tin3/ Tin4 and Tin11/ Tin4 was devel oped for detecting teliospore of Tilletia indica and Tilletia w alkeri . One teliospore can be amplified and obtained specific band. The process of detection can be finished within 8 hours. Because of avoidance of DNA extraction , the method can be used for de tection of dormant teliospore of T . indica and T . w alkeri . Key words : Tilletia indica ; Tilletia w alkeri ; nested PCR ; detection 小麦印度腥黑穗病菌 ( Tilletia indica Mitra) 是我国规定的一类危险性有害生物 , 主要分布在南亚 地区、巴西、墨西哥、美国和南非等地[1 ,2 ] 。1996 年小麦出口大国美国也发生了小麦印度腥黑穗病。黑 麦草腥黑穗病菌 ( Tilletia w alkeri ) 是美国于 1999 年报道的新种 , 其冬孢子和 T . indica 冬孢子的大 小和形态特征非常相似[3 ] , 两者都有可能出现在小麦中 , 易于混淆 , 美国曾在一段时间