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中华人民共和国国家标准 GB 5413.12—2010 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素 B2 的测定 National food safety standard Determination of vitamin B2 in foods for infants and young children, milk and milk products 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施 中华人民共和国卫生部 发布 GB 5413.12—2010 前 言 本标准代替GB/T 5413.12-1997 《婴幼儿食品和乳粉维生素B 的测定》。 2 本标准与GB/T 5413.12-1997相比，主要变化如下： ——标准名称改为《婴幼儿食品和乳品中维生素B2 的测定》。 ——取消了方法一荧光分光光度法； ——对原标准的结构进行了修改； ——混合酶液中增加了酸性磷酸酶，以解决添加核黄素磷酸盐作为维生素B2强化剂的样品测定； ——样品处理方法中增加了“避免强光照射”的注意点； ——外标法定量采用多点标准曲线法； ——在结果计算时明确样品中维生素B2含量以核黄素计； ——增加附录A标准溶液的液相色谱图。 本标准附录A为资料性附录。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： ——GB 5413-1985 、GB/T 5413.12-1997 。 I GB 5413.12—2010 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素B2 的测定 1 范围 本标准规定了婴幼儿食品和乳品中维生素 B2 的测定方法。 本标准适用于婴幼儿食品和乳品中维生素 B2 的测定。 2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 3 原理 试样在稀盐酸环境中恒温水解，酶解，经 C18 反相色谱柱分离，用荧光检测器（Ex ：462 nm，Em ： 522 nm ）检测，外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 盐酸。 4.2 三水乙酸钠。 4.3 冰乙酸。 4.4 甲醇：色谱纯。 4.5 维生素 B2 （核黄素）标准品：纯度≥99% 。 4.6 盐酸（1+1）：量取 100 mL 盐酸（4.1 ）缓慢倒入 100 mL 水中，混匀。 4.7 盐酸（0.1 mol/L ）：吸取9 mL 盐酸（4.1 ），溶于 1000 mL 水中。 4.8 盐酸（0.01 mol/L ）：吸取0.1 mol/L 盐酸（4.7 ）50 mL，用水稀释并定容至 500 mL 。 4.9 乙酸钠溶液（0.05 mol/L ）：称取 6.80 g 三水乙酸钠（4.2 ），加 900 mL 水溶解，用冰乙酸调 pH 值 至 4.0～5.0，用水定容至 1000 mL 。经0.45 μm 微孔滤膜过滤。 4.10 乙酸钠溶液（2.0 mol/L ）：称取27.22 g 三水乙酸钠（4.2 ），用水溶解并定容至 100 mL。 4.11 混合酶溶液：称取 2.345 g 木瓜蛋白酶（活力单位≥600 U/g ）、1.175 g 淀粉酶（活力单