第十五章生物技术在作物育种上的应用PPT.pptVIP

农杆菌共培养侵染 诱导愈伤组织 分化生芽 生根 叶盘转化法 第十五章 生物技术在作物育种中的应用 一 细胞和组织培养在作物育种中的应用 1 体细胞克隆变异及其育种利用 无性系变异（somaclonal variation）：植物体细胞在离体条件下，以及在离体培养之前，会发生各种遗传和不遗传的变异，把遗传的变异称为无性系变异。 变异体（varient）：不加任何选择压力而筛选出的变 异个体。 突变体（mutant）：经过施加某种选择压力所筛选出 的无性系变异。 （1）通过组织培养获得变异体或突变体的方式 方法 ① 组培之前的变异及选择 例：烟草抗除草剂变异体的筛选 （灭草松、甲二威灵） ② 组培期间的变异及选择：正向选择 例： 玉米抗小斑病T小种 未成熟胚 愈伤组织 加T小种毒素 抗性愈伤组织 移栽 再生植株 高粱胚性愈伤组织 （3）体细胞无性系在作物改良中的应用 雄性不育突变体：张家明等获得89个棉花体细胞再生植株，其中1株为雌、雄全不育，2株为雄性不育，6株为生理不育； 耐盐突变体：多数变异体的耐盐性是生理适应的结果，仅有少数几例是真实遗传的突变体； 抗除草剂突变体：利用小麦幼胚筛选出能耐100-200mg/L锈去津的细胞突变体，并获得再生植株； 抗病突变体：利用病原菌分泌的毒素制作选择培养基，可筛选出抗病突变体。 2 诱导产生单倍体 单倍体细胞培养在遗传和育种的应用： 后代的迅速纯合；单倍体产生加倍单倍体（DH系）； 提高选择效率：比常规杂交育种效率高； 排除杂种优势对后代选择的干扰：DH群体基因位点纯合； 遗传研究的好材料：检测基因互作、估计遗传变异等； 突变体的筛选：单倍体基因纯合，突变体易表现； 遗传转化的受体材料：加快转基因后代的稳定速度。 3 胚培养 （1）胚挽救 远缘杂交合子胚常中途败育（稻、麦属种间杂种）； 应用于早熟品种的选育。 （2）胚状体和胚性愈伤组织的诱导 水稻、小麦、玉米可通过离体培养产生胚状体； 形成人工种子（胚状体用褐藻酸钠包埋再加上人工 种皮）。 优点：繁殖快、成苗率高、不受季节限制。 4 种苗脱毒与快繁 （1）种苗脱毒：无性繁殖作物如薯类、草莓、花卉等， 可通过组织培养淘汰病毒，进行脱毒； （2）快速繁殖：大多数果树、观赏植物是杂合的，若要 保持原种特性，需利用茎尖培养快速繁殖。 马铃薯脱毒种薯快速繁殖 5 在转基因育种中的应用 通过组织培养，使细胞或组织脱分化，产生愈伤组织，为遗传转化提供适宜的受体材料； 将遗传转化后的植物细胞再分化形成完整植株，为遗传转化提供良好的再生系统。 二 作物原生质体培养与体细胞杂交 原生质体：指用特殊方法脱去细胞壁的、裸 露的、有生活力的原生质团。 体细胞杂交（somatic hybridization）：又称原生质体融合（protoplast fussion） ，是指两种原生质体间的杂交。 1 原生质体的分离和培养 禾本科原生质体培养经验： （1）先进行细胞或组织培养：选择分化和再生潜力大的基 因型为材料； （2）利用胚性细胞系游离原生质体：用胚性细胞悬浮系和 胚性愈伤组织制备； （3）选用合适的培养基和方法：KM8P效果较好； （4）选择合适的酶制剂：禾本科作物采用Onzuka R-10和 Onzuka Rs纤维素酶以及Pectolyase果胶酶效果好。 2 原生质体的融合 关键是融合剂的选用。 早期用0.25mol/L的NaNO3和高Ca2+;后来用PEG和Ca2+、高PH溶液；最近用电融合技术。 电融合仪 原生质体电融合 3 杂种细胞的鉴别和选择 （1）用选择性培养基培养：创造专门使杂种细胞生长的条件； （2）互补选择法：用标记性状的互补进行选择； （3）异核体机械分离和杂种细胞的核型分析 将细胞分离进行悬滴培养，再进行核型筛选； （4）体细胞杂种和胞质杂种的鉴别 4 诱导杂种细胞产生愈伤组织和再生植株 目前尚无成熟的方法和经验。 三 转基因技术在作物育种中的应用 转基因育种的优势： 扩大作物育种的基因库； 提高作物育种的效率； 拓宽作物生产的范畴：培