第12章-2 RNA的代谢.pptVIP

在转录区，只有一小段DNA的一条DNA链作为模板链(template strand)，称为不对称转录。 大肠杆菌RNA聚合酶各亚基的功能 p327 在DNA链上开始转录的第一个碱基规定为+1，与转录相反的方向称上游(up stream)；转录方向为下游(down stream)。在上游方向与转录起点相邻位置定为-1。 普遍认为：-35区是RNA聚合酶最先的结合部位 ，形成所谓“闭合复合物”，然后向下游移动至富含AT的-10区域，这是转录时开始解链的部位，此时形成“开放复合物” ，是链DNA局部解链。当滑向转录起点，并引入第一个NTP,启动RNA的合成。 在开放性启动子复合物中起始位点和延长位点被相应的核苷酸前体充满，在RNA聚合酶β亚基催化下形成RNA的第一个磷酸二酸键。 RNA链的延伸阶段结合几个核苷酸后， σ因子从全酶上解离下来，可再次和新的核心酶结合。 σ因子解离后的核心酶缺乏转移识别启动子的能力。 不依赖于ρ-因子的终止子：核心酶本身即可终止转录； 依赖于ρ-因子的终止子：需要ρ因子的帮助才能实现终止作用。 两类终止子有共同的序列特征，在转录终止之前都有一段回文结构，这段互补序列之间由几个碱基隔开。 不依赖ρ因子的终止子(强终止子)有一富含G-C的二重对称区，其下游有6～8个A； 由这段DNA转录产生RNA容易形成发夹结构；并导致转录本3’端为寡聚U。这两种结构特征决定了转录的终止。 一方面，在新生RNA中出现发夹结构会阻止聚合酶前进，破坏RNA-DNA杂合链的正常结构。 依赖ρ因子的终止子(弱终止子)中G-C碱基对含量较少，转录生成的RNA也可形成二级结构为发夹结构，这样的结构可能阻碍了RNA聚合酶进一步发挥作用。 如：嘌呤生成甲基嘌呤；尿嘧啶还原为双氢尿嘧啶;尿嘧啶核苷转变为假尿嘧啶核苷，腺苷酸脱氨基成为次黄嘌呤核苷酸等。 12.2.1.5 真核生物的转录 真核生物的RNA聚合酶 RNA polⅠ位于核仁中，负责转录编码rRNA基因( 细胞内绝大部分RNA是rRNA)。 RNA polⅡ位于核质中，负责核内不匀一RNA (hnRNA)的合成，而hnRNA是mRNA的前体。 RNA pol Ⅲ负责合成tRNA和许多小的核内RNAs。 真核生物有三种以上RNA聚合酶，都有自己的启动子。其中RNA polⅡ启动子核苷酸序列有共同特点： 在-25区有TATA框（Hogness box或Goldberg-Hogness box）。 保守序列为：T28A97A93A85A63T37A83A50T37，富含A、T，TATA框，决定了转录起点的选择。 在-75区有CAAT框，保守序列为GGTCAATCT。CAAT框与转录起始频率有关。 在更上游处还有GC框， 真核生物的结构基因(为“断裂基因”)中具有可表达活性的外显子，也含有无表达活性的内含子。 内含子的数量与所在基因的大小有关。许多基因中的内含子参与基因表达调控。 在转录时，外显子及内含子均转录到hnRNA中。 核中hnRNA在核酸内切酶作用下剪切掉内含子；然后在连接酶作用下，将外显子各部分连接起来，而变为成熟的mRNA。 真核生物有4种rRNA，其中18SrRNA、28SrRNA、5.8SrRNA为一个转录单位，哺乳动物的初级转录产物为47S，低等真核生物的rRNA前体为38S；而5SrRNA存在于另一个转录单位。 真核生物rRNA前体中含有插入顺序，rRNA前体经过自动拼接反应形成成熟的rRNA。 以前一直认为只有蛋白质有酶活性。近年发现RNA也可有酶活性。这种有酶活性的RNA称为核酶。 T.Cech和S.Altman发现四膜虫（Tetrahumena）的RNA具有催化作用，这对于了解生命进行过程有重要意义。很可能在原始生命中，RNA所催化的断裂连接反应是最早出现的催化过程。 他们共同获得了1989年Nobel化学奖。 四膜虫Tetrahumena 的两个主要rRNAs的基因被转录在同一个35S的初级转录本中。在编码26SrRNA序列存在一个内含子。 如将35S前体RNA在体外温育，可发生自动剪接作用：内含子从前体中被切出。 被切除部分形成环状结构，同时从5’-端切除15nt碎片。剩余部分连接成399核苷酸的环状产物，再切下4nt，最后形成的缺失19nt线性内含子序列 即L-19RNA， 它具有催化活性。 某些病毒，噬菌体的遗传信息贮存在RNA分子中，当它们进入宿细胞后，靠复制而传代。 RNA复制：以RNA为模板在RNA聚合酶催化下合成RNA。 当以RNA为模板时，在RNA复制酶作用下，按5‘→3’方向合成互补的RNA分子，但RNA复制酶缺乏校正功能，因此RNA复制时错误率很高。 RNA复制酶只对病毒本身RNA起作用，而不会作用于宿主细胞中的RNA分子。