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论文答辩模板PPT胰腺炎中细胞凋亡的调控

汇报者: 组 员: 在蛙皮素诱导大鼠的急性胰腺炎中GRP78和XIAP与细胞凋亡的关系 文献来源(Sources of Literature) 内容目录(Table of Contents) 1 背景(Introduction) 2 研究目的(Aim of Research) 3 材料和方法(Materials and methods) 4 结果(Results) 5 讨论(Discussion) 背景(Introduction) 急性胰腺炎(AP)是胰腺的一种炎症性疾病,其发病率和死亡率相当高,但是至今对其的发病机制仍未完全清楚。近年来一些研究表明胰腺腺泡细胞的死亡包括坏死和凋亡两种,而且其严重程度与细胞坏死的程度直接相关,与细胞凋亡的程度呈负相关。 细胞凋亡的主要途径中通过激活凋亡蛋白酶(caspases),其特异水解一套蛋白底物,从而导致细胞凋亡。细胞内caspases与其抑制剂总是共存的,以免Caspases酶原被意外激活,对正常细胞造成损伤。XIAP和GRP78就是例子。 背景(Introduction) X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)是新发现的一个IAP家族中的主要成员,是IAP家族中最强的凋亡抑制因子,它可直接抑制caspases并可多途径调节细胞凋亡。 葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78),又名免疫球蛋白重链结合蛋白(BiP)或人70kDa热休克蛋白5(HSPA5),不仅是主要的分子伴侣,也具有抗凋亡的作用。 研究目的(Aim of Research) 本实验主要研究GRP78和XIAP在蛙皮素诱导的急性胰腺炎中参与细胞凋亡调控的可能作用。 材料和方法(Materials and methods) 雄性Wistar大鼠36只,体重在200-220g 蛙皮素诱导胰腺炎组 盐水对照组 6只 按取样时间 随机 24h 6只 6h 6只 12h 6只 3h 6只 1h 6只 胰腺组织水肿的评估 血清淀粉酶和脂肪酶的测定 胰腺组织学检查 凋亡指数的测定 GRP78、XIAP、caspase-3、 caspase-7、 caspase-9的表达测定 蛙皮素, 50μg/kg,腹腔注射,共4次,每次间隔1h 盐水,同理 最后一次注射后,按取样时间处死大鼠,取出新鲜胰腺、抽取下腔静脉血 材料和方法(Materials and methods) 材料和方法(Materials and methods) 材料和方法(Materials and methods) 胰腺的组织学检查 方法:按常规组织学检查,10%福尔马林固定,石蜡包埋后做成4μm的切片,然后进行HE染色。 凋亡指数的测定 方法:使用原位细胞死亡检测试剂盒进行检测细胞凋亡。将之前准备好的组织学切片放在37℃的TUNEL反应混合物中孵育1小时。最后,通过荧光显微镜(波长为450-500nm)进行分析,使用图像采集系统获取图像。TUNEL阳性细胞显示明亮的绿色荧光。凋亡指数(AI):对每张片随机选取10个高倍镜视野,并计算每个视野的TUNEL阳性细胞的百分比,求10次的平均值所得。 实时定量逆转录-聚合酶链反应 方法:取每只大鼠的新鲜胰腺组织50-80mg,用TRIzol分离出总的RNA。取总的RNA 5μg进行反转录,反转录后的产物取1μg在引物的作用下进行PCR。 引物序列如下: GRP78: 5-GAAACTGCCGAGGCGTAT-3 / 5-ATGTTCTTCTCTCCCTCTCTCTTA-3; Caspase-3: 5-CGGACCTGTGGACCTGAAA-3 / 5-GGGTGCGGTAGAGTAAGC-3; Caspase-7: 5-TCTATGTGCCCCGTCAGTA-3 / 5-ACATCCATACCTGTCGCTTT-3; Caspase-9: 5-ACGACCTGACTGCTAAGAAA-3 / 5-AGCCATGAGAGAGGATGAC-3; XIAP: 5-TGTGAGTGCTCAGAAAGATAAT-3 / 5-TGCTTCTGCACACTGTTTACA-3; β-actin: 5-CGTGAAAAGATGACCCAGAT-3 / 5-ACCCTCATAGATGGGCACA-3 材料和方法(Materials and methods) Western blot检测 提取总蛋白:用二辛可宁酸性蛋白检测试剂盒测定其浓度。 电泳:将其分成每20μg一份,经过12%的钠十二烷基硫酸盐-聚丙烯酰胺凝胶电泳。 转膜:转移到聚偏氟乙烯二氟

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