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论文答辩模板PPT胰腺炎中细胞凋亡的调控
汇报者:
组 员:
在蛙皮素诱导大鼠的急性胰腺炎中GRP78和XIAP与细胞凋亡的关系
文献来源(Sources of Literature)
内容目录(Table of Contents)
1 背景(Introduction)
2 研究目的(Aim of Research)
3 材料和方法(Materials and methods)
4 结果(Results)
5 讨论(Discussion)
背景(Introduction)
急性胰腺炎(AP)是胰腺的一种炎症性疾病,其发病率和死亡率相当高,但是至今对其的发病机制仍未完全清楚。近年来一些研究表明胰腺腺泡细胞的死亡包括坏死和凋亡两种,而且其严重程度与细胞坏死的程度直接相关,与细胞凋亡的程度呈负相关。
细胞凋亡的主要途径中通过激活凋亡蛋白酶(caspases),其特异水解一套蛋白底物,从而导致细胞凋亡。细胞内caspases与其抑制剂总是共存的,以免Caspases酶原被意外激活,对正常细胞造成损伤。XIAP和GRP78就是例子。
背景(Introduction)
X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)是新发现的一个IAP家族中的主要成员,是IAP家族中最强的凋亡抑制因子,它可直接抑制caspases并可多途径调节细胞凋亡。
葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78),又名免疫球蛋白重链结合蛋白(BiP)或人70kDa热休克蛋白5(HSPA5),不仅是主要的分子伴侣,也具有抗凋亡的作用。
研究目的(Aim of Research)
本实验主要研究GRP78和XIAP在蛙皮素诱导的急性胰腺炎中参与细胞凋亡调控的可能作用。
材料和方法(Materials and methods)
雄性Wistar大鼠36只,体重在200-220g
蛙皮素诱导胰腺炎组
盐水对照组
6只
按取样时间
随机
24h
6只
6h
6只
12h
6只
3h
6只
1h
6只
胰腺组织水肿的评估
血清淀粉酶和脂肪酶的测定
胰腺组织学检查
凋亡指数的测定
GRP78、XIAP、caspase-3、 caspase-7、 caspase-9的表达测定
蛙皮素, 50μg/kg,腹腔注射,共4次,每次间隔1h
盐水,同理
最后一次注射后,按取样时间处死大鼠,取出新鲜胰腺、抽取下腔静脉血
材料和方法(Materials and methods)
材料和方法(Materials and methods)
材料和方法(Materials and methods)
胰腺的组织学检查
方法:按常规组织学检查,10%福尔马林固定,石蜡包埋后做成4μm的切片,然后进行HE染色。
凋亡指数的测定
方法:使用原位细胞死亡检测试剂盒进行检测细胞凋亡。将之前准备好的组织学切片放在37℃的TUNEL反应混合物中孵育1小时。最后,通过荧光显微镜(波长为450-500nm)进行分析,使用图像采集系统获取图像。TUNEL阳性细胞显示明亮的绿色荧光。凋亡指数(AI):对每张片随机选取10个高倍镜视野,并计算每个视野的TUNEL阳性细胞的百分比,求10次的平均值所得。
实时定量逆转录-聚合酶链反应
方法:取每只大鼠的新鲜胰腺组织50-80mg,用TRIzol分离出总的RNA。取总的RNA 5μg进行反转录,反转录后的产物取1μg在引物的作用下进行PCR。
引物序列如下:
GRP78: 5-GAAACTGCCGAGGCGTAT-3 / 5-ATGTTCTTCTCTCCCTCTCTCTTA-3;
Caspase-3: 5-CGGACCTGTGGACCTGAAA-3 / 5-GGGTGCGGTAGAGTAAGC-3;
Caspase-7: 5-TCTATGTGCCCCGTCAGTA-3 / 5-ACATCCATACCTGTCGCTTT-3;
Caspase-9: 5-ACGACCTGACTGCTAAGAAA-3 / 5-AGCCATGAGAGAGGATGAC-3;
XIAP: 5-TGTGAGTGCTCAGAAAGATAAT-3 / 5-TGCTTCTGCACACTGTTTACA-3;
β-actin: 5-CGTGAAAAGATGACCCAGAT-3 / 5-ACCCTCATAGATGGGCACA-3
材料和方法(Materials and methods)
Western blot检测
提取总蛋白:用二辛可宁酸性蛋白检测试剂盒测定其浓度。
电泳:将其分成每20μg一份,经过12%的钠十二烷基硫酸盐-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
转膜:转移到聚偏氟乙烯二氟
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