第三章 生物信息的传递(DNA-RNA)2.ppt

Chapter 3 Transcription（Ⅱ）RNA的加工、修饰与编辑 一、原核生物的RNA转录后加工与修饰 （一）原核生物的mRNA转录后加工 原核生物的结构基因是连续编码序列，转录形成的mRNA绝大数不需加工修饰。原核生物没有核膜，转录和翻译是相偶合的，往往转录还未完成已开始翻译。 （二）原核生物rRNA前体的加工 ①rRNA在修饰酶催化下进行碱基的甲基化修饰； ②rRNA前体被RNaseⅢ、RNase E、RNase P、RNase F等剪切成一定链长的rRNA分子； ③rRNA与蛋白质结合形成核糖体的大、小亚基。 （三）原核生物 tRNA的加工 ①tRNA前体被tRNA剪切酶切成一定大小的tRNA分子。 大肠杆菌RNase P（tRNA 5’成熟酶）可特异剪切tRNA前体的5’端顺序。 RNase D是tRNA 3’端成熟酶，它可将tRNA前体3’端的一段核苷酸序列切除。 ②成熟tRNA分子中的稀有碱基是通过修饰形成的。 如：嘌呤生成甲基嘌呤；尿嘧啶还原为双氢尿嘧啶；尿嘧啶核苷转变为假尿嘧啶核苷；腺苷酸脱氨基成为次黄嘌呤核苷酸等。 ③3’-末端加上CCA 在核苷酸转移酶作用下，3’-末端除去个别碱基后，换上tRNA分子统一的CCA-OH末端，完成tRNA分子中的氨基酸臂结构。 原核生物中有2种3’-端不同的tRNA前体：Ⅰ型3’-端有CCA序列；Ⅱ型没有CCA，tRNA核苷酸转移酶可将CCA加到3’端。 真核生物中可能所有的tRNA前体都属于Ⅱ型，在成熟时都需要通过酶的作用，在其3’端加上CCA序列。 二、真核生物RNA的合成与加工 在真核生物中已发现了RNA polⅠ、Ⅱ、Ⅲ、线粒体RNA pol和叶绿体RNA pol等，它们专一性地转录不同的基因。 线粒体和叶绿体的RNA pol类似于细菌的RNA pol。 鹅膏蕈碱是真核生物RNA聚合酶特异抑制剂，3种真核RNA pol对鹅膏蕈碱的敏感性不同。 （1）RNA聚合酶Ⅰ位于核仁中，负责转录编码rRNA的基因（细胞内绝大部分RNA是rRNA）。 （2）RNA聚合酶Ⅱ位于核质中，主要负责核内不匀一RNA的合成，而hnRNA是mRNA的前体。 （3）RNA聚合酶Ⅲ负责合成tRNA和许多小的核内RNAs。 原核生物靠RNA聚合酶就可完成从起始、延长、终止的转录全过程； 真核生物转录除RNA聚合酶外还需另一些叫做转录因子的蛋白质分子参与转录的全过程。 RNA聚合酶II及转录因子是在启动子上装配的。 真核生物的RNA聚合酶借助于转录因子来辨认启动子及解开双螺旋。 与RNA PolⅡ联合的转录因子有TFⅡA、TFⅡB、TFⅡD、TFⅡE、TFⅡF和TFⅡH等6种。 TFⅡD能与启动子结合，并吸引其它转录因子以及聚合酶进到转录启动区。 转录因子与RNA polⅡ共同组成转录起始复合物，转录才能在正确的位置上开始。 TFⅡH利用ATP的能量解开双螺旋。DNA熔链的位置约从转录起点上游10bp开始，RNA PolⅡ根据模板链的碱基顺序将NTP聚合成RNA。 在RNA延伸的阶段，除了TFⅡF仍与聚合酶结合外，其余的转录因子都离开RNA PolⅡ。 RNA PolⅡ最大的亚基C端的一段肽链称为CTD(carboxyl-terminal domain)。含有很多个脯氨酸、丝氨酸和苏氨酸。启动转录时CTD需处在未磷酸化状态。启动后CTD需被磷酸化才能延伸RNA。 真核基因转录起始是基因表达调控的关键，多种蛋白因子间相互作用，以及这些蛋白因子与DNA元件相结合，构成控制基因转录开始的复杂体系。 真核生物转录的延伸阶段与原核生物相似。合成速度30~50nt/S，但速度不定，遇到G/C后，时间延迟。 2.真核RNA合成的终止 对真核生物转录的终止和机制了解很少。由于RNA转录后很快就进行加工，很难确定原初转录物的3’-末端。 RNA PolⅡ所转录的基因在最后一个外显子下游都具有一个加Poly-A的信号AATAAA序列，而RNA PolⅡ一般在该位点下游停止转录。 3.RNA转录后的加工与修饰 真核细胞所有RNA都是以复杂的初级转录物形式被合成的。似乎RNA的加工成熟对调节mRNA、rRNA和tRNA从胞核到胞浆转运起关键作用。 割裂基因（split gene）：指编码某一RNA的基因中有些序列并不出现在成熟的RNA序列中，成熟RNA的序列在基因中被其他的序列隔开。 内含子（intron）：原初转录物中通过RN