发酵分析实验报告实验一：热带假丝酵母产SCP发酵过程的分析.docx

发酵分析实验报告本组完成的任务有：18%中性甲醛的配制；0.2mol/L NaOH标准液的配制；测发酵液中分别加水、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的发酵瓶中的菌体浓度、还原糖浓度、氨氮含量。未明确分工，每个任务均由各个成员共同完成，实验过程，每位小组成员都积极参与，相互配合，，实验成功完成，且完成速度快。实验一：热带假丝酵母产SCP发酵过程的分析实验目的 单细胞蛋白（SCP)含有丰富的氨基酸、还原糖等物质。本实验对四种培养基分别培养的热带假丝酵母产SCP发酵过程的分析，掌握发酵过程有关参数的测定和分析方法。材料和方法菌种：热带假丝酵母，发酵摇床等各种仪器。四种培养基：碳源分别是葡萄糖（P)、麦芽糖(M）、蔗糖（Z）、水（不含任何糖），蛋白胨、MgSO4、KH2PO4、pH自然。分析测定项目：发酵液菌体干重、还原糖量、NH2-N。实验过程1. 发酵液取样接种培养好后，从四种培养基中各取发酵液1ml，稀释20倍。2.测定菌浓OD700： （1）用蒸馏水作对照，作空白调零在波长700nm分别测定四种不同碳源的菌悬液的OD值。记录数据。 （2）依据下列表格，通过换算发酵液菌体干重。（表1） 表1 发酵液菌体干重与ODOD（稀释100倍）00.1380.1290.2350.2050.2760.2540.3450.33410ml发酵液菌体干重(g)00.11060.10820.16390.15460.19810.19340.22440.2133线性方程：y=0.6331x+0.017 （y：10ml发酵液菌体干重；x：OD700值；相关系数r=0.9858）3.葡萄糖的标准曲线的制作： （1）配制1.0g/l的标准葡萄糖溶液、DNS（3,5-二硝基水杨酸） （2）分别吸1.0g/l的标准葡萄糖溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8ml于试管中，再补加蒸馏水至2ml,加DNS试剂2.0ml混匀，于沸水浴中准确反应5min，取出立即冷水浴中冷却至室温，然后定容至25ml,以空白管调零在波长540nm处比色，以OD值为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标制作标准曲线。 4.发酵液中的糖浓度： 分别将四种培养基P葡萄糖、M麦芽糖、Z蔗糖、水（没加任何糖）稀释后的菌悬液，取1ml于试管中，按照葡萄糖标准曲线制作的程序进行葡萄糖含量的测定，根据发酵液稀释倍数和葡萄糖标准曲线，计算出发酵液中还原糖含量。发酵液NH2-N的测定方法： （1）配制0.03%硫酸液、18%中性甲醛、0.2mol/l氢氧化钠标准液 （2）取稀释20倍的菌悬液10ml，于20ml烧杯中，加入50ml 的0.03%硫酸液，摇匀，放置10min, 用pH标准缓冲液校正后的pH电极插入到烧杯中，（本组用pH试纸，比色卡），搅拌摇匀，用0.2mol/l氢氧化钠标准液中和至pH=6，加入18%中性甲醛5ml,摇匀，放置10min, 再用0.2mol/l氢氧化钠标准液滴定至pH=9，记录第二次用碱式滴定管滴定时消耗氢氧化钠标准液的体积Vml. (3) 计算：发酵液氨氮含量N%（mg/100ml)=600V。（经由公式推导） 实验结果分析实验数据记录表格不同发酵液中菌浓的OD值（表1） 表2 四种发酵液中菌浓的OD值 2. 不同葡萄糖浓度的OD值（表2） 表3 葡萄糖浓度与OD葡萄糖浓度 （mg/ml) 00.20.40.60.8吸光度值00.0660.2130.3480.290 3. 发酵液中的还原糖浓度、氨基氮含量测定 （表3） 表4 四种培养基各参数测定数据记录总表P葡萄糖M麦芽糖Z蔗糖水还原糖0D5400.8290.8460.6520.755NaOH体积1.11.11.没测（2）实验数据处理 ①发酵液菌体干重线性方程：y=0.6331x+0.017 ，y表示10ml发酵液菌体干重，x表示OD700值。将四个OD700值代入，考虑到线性方程OD700是在稀释100倍测得的，而本实验在稀释20倍测得，以及发酵液干重（g/L) , ，所以发酵液干重（g/L) = y×0.2×100。②还原糖浓度 （表4） 表4 葡萄糖标准曲线由这标准曲线，y=0.431x-0.011, y表示还原糖浓度，x表示OD540值，由稀释度为20，所以还原糖浓度=y×20。③氨基氮含量计算：由公式 ，其中C=0.2(mol/l),M=14.01(g/mol)。推导发酵液氨氮含量N%（mg/100ml)=600V。由①②③可知参数分析结果为：（表5） 表5 四种培养基各参数测定数据处理总表P葡萄糖M麦芽糖Z蔗糖水还原糖(mg/ml)6.92607.07255,.40026.2881氨基氮含量（mg/100ml)660660900发酵液干重4．25267.633310.90347.532制成柱形图如下：图形（75%）