电场强度ν电泳.PPT

第九章 毛细管电泳 （四）高效毛细管电泳仪 三 高效毛细管电泳 电压：0～30kV； 分离柱不涂敷任何固定液； 紫外或激光诱导荧光检测器（可检测到：10-19～10-21 mol/L）。 动画: 高效毛细管电泳仪 第九章 毛细管电泳 （四）高效毛细管电泳仪 三 高效毛细管电泳 1.高压电源 （1）0～30 kV 稳定、连续可调的直流电源； （2）具有恒压、恒流、恒功率输出； （3）电场强度程序控制系统； （4）电压稳定性：0.1%； （5）电源极性易转换； 2.毛细管柱 （1）材料：石英：各项性能好；玻璃：光学、机械性能差； （2）规格：内径20～75μm，外径350～400μm；长度≤1m 第九章 毛细管电泳 （四）高效毛细管电泳仪 三 高效毛细管电泳 3.缓冲液池 化学惰性，机械稳定性好； 4. 检测器 要求：具有极高灵敏度，可柱端检测； 检测器、数据采集与计算机数据处理一体化； 类型 检测限/mol 特点 紫外-可见 10-13～10-15 加二极管阵列，光谱信息 荧光 10-15～10-17 灵敏度高，样品需衍生 激光诱导荧光 10-18～10-20 灵敏度极高，样品需衍生 电导 10-18～10-19 离子灵敏，需专用的装置 第九章 毛细管电泳 （五）影响柱效的因素与改进方法 三 高效毛细管电泳 使用添加剂可以改变电渗流的大小和方向，如添加NaCl和甲醇可降低电渗流；加入乙腈则可以增大电渗流。加入反转剂则可以改变电渗流的方向。 热效应：焦耳热是影响柱效的主要因素。采用外部冷却的方法散热，选择合适的电压和电解质也是提高柱效的有效途径。选择合适的电解质降低电阻，电流低于200微安，一般几十微安。 电渗流控制：电渗流的大小和方向依赖于毛细管壁与溶液间电势的极性和大小。 第九章 毛细管电泳 （五）高效毛细管电泳的特点 三 高效毛细管电泳 三高二少一广 高质量灵敏度：常用紫外检测器的检测限可达10-13-10-15 mol/L，激光诱导荧光检测器(LIF)则达10-19-10-21 mol/L。 高效：每米理论塔板数为几十万，高者可达几百万乃至几千万。 高速度：许多分析可在10分钟内完成，有的可在60秒内完成。 所需样品少：只需纳升(10-9升)的进样量。 仪器简单成本低：只需少量(几毫升)的流动相和低廉的毛细管。 应用范围广：除分离生物大分子（肽、蛋白、DNA和糖等）外，还可用于小分子(氨基酸、药物等)及离子(无机及有机离子等)，甚至可分离各种颗粒(如硅胶颗粒等)。 第九章 毛细管电泳 （五）高效毛细管电泳的特点 三 高效毛细管电泳 不足之处： 进样不够方便。 应用范围相对较窄。 分析阴离子时，由阴极进样，在阳极检测。但电渗流 方向与阴离子受电场力作用移动方向相反，出峰时间 较长。 动画：高效毛细管电泳与气相色谱、液相色谱的柱效比较 第九章 毛细管电泳 （六）高效毛细管电泳的分离类型 名称 缩写 管内填充物 说明 毛细管区带电泳 CZE pH缓冲的自由电解质溶液，可含有一定功能的添加剂。 属自由溶液电泳型，但可通过加添加剂引入色谱机理 胶束电动毛细管色谱 MECC CZE载体＋带电荷的胶束 CZE扩展的色谱型 微乳液电动毛细管色谱 MEECC 由缓冲液、不溶于水的有机溶剂和乳化剂构成的微乳液。 CZE扩展的色谱型 毛细管凝胶电泳 CGE 各种电泳用凝胶或其他筛分介质 属非自由溶液电泳，含有“分子筛”效应 毛细管等电聚焦 CIEF 建立pH梯度的两性电解质 按等电点分离，属电泳型，要求完全抑制电渗流动 毛细管电动色谱 CEC CEZ载体＋液相色谱固定相 属非自由溶液色谱型 非水毛细管电泳 NACE 含有电解质的非水体系 属自由溶液电泳型 第九章 毛细管电泳 （六）高效毛细管电泳的分离类型 三 高效毛细管电泳 1.毛细管区带电泳（CZE）：最普遍、最基本的一种分离模式。 CZE的分离机理是基于各被分离物质的净电荷与质量比(荷质比)间的差异。应用范围包括氨基酸、肽、蛋白、离子分析、对映体拆分和很多其它离子态物质的分析。 动画：毛细管区带电泳 第九章 毛细管电泳 （六）高效毛细管电泳的分离类型 三 高效毛细管电泳 2.毛细管凝胶电泳（CGE）: CGE是将聚丙烯酰胺在毛细管柱内交联生成凝胶作支持物进行的电泳。凝胶具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。可分离测定蛋白质、DNA等。 蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关，CZE模式很难分离，采用