作业指导书53(食品菌落总数).docVIP

作 业 指 导 书 编号：ZQCDC／ZY53 食品卫生微生物学检验操作规程 起草:东晓辉 2011年5月1日 审核:包图雅 2011年5月1日 批准:陈玉柱 2011年5月5日 作业指导书 编号ZQCDC／ZY53 第1页 共3页 食品微生物学检验菌落总数测定 第2版 第1次修订 实施日期：2011年05月01日 1、目的： 依据GB/T4789.2—2010食品卫生微生物学检验菌落总数测定检验规程，规范操作者的检验方法，保证测定结果的准确性。 2、适用范围： 本标准规定了菌落总数检验方法，本标准适用于各类食品菌落总数的测定。 3、责任：使操作者熟悉本规程，并在具体检验中严格遵照操作，确保检测结果准确。 4、设备和材料（除微生物实验室常规灭菌培养设备外，其它设备和材料如下：） 4.1 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃。 4.2 冰箱：2℃～5℃。 4.3 恒温水浴箱：46℃±1℃。 4.4 电子天平：感量0.1g。 4.5 均质器。 4.6 振荡器。 4.7 无菌吸管：1ml(具0.01mL刻度)、10mL、（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 4.8 无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。 4.9 无菌培养皿：直径90mm。 4.10 PH计或PH比色管或精密PH试纸。 4.11 放大镜或（和）菌落总数器或PetrifilmTM自动判读仪。 5、培养基和试剂 5.1 平板计数琼脂培养基 5.2 磷酸盐缓冲液 5.3 无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。 5.4 1moL/L盐酸（HCL）：移取浓盐酸90mL,用蒸馏水稀释至1000mL。 6、检验程序见图1 7.1操作步骤 7.1.1 固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～1000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1：10的样品匀液。 7.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。 7.1.3用1mL无菌吸管或吸头（尖端不要触及稀释液面），振摇试管换用一支无菌吸管反复吹打打其混合均匀，制成1：100的样品匀液。 7.1.4按以上操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增一次，换用一次1mL无菌吸管或吸头。 7.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样品液加入两个无菌平皿内。同时 作业指导书 编号ZQCDC／ZY53 第2页 共3页 食品微生物学检验菌落总数测定 第2版 第1次修订 实施日期：2011年05月01日 分别取1mL稀释液加入两个无菌平皿作空白对照。 7.1.6 及时将15ml～20ml冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿混合均匀。 7.2 增菌 7.2.1 琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。 7.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4ml）,凝固后翻转平板，按以上条件进行培养。 7.3 菌落计数 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落开成单位（colony-forming units,CFU）表示。 7.3.1 选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓廷菌落生长的平板计数菌落总数量。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300的可记录为多不可计。每个稀释度的的菌落数应采用两个平板的平均数。 7.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 7.3.2 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条链作为一个菌落计数。 8、结果表述 8.1 菌落总数的计算方法 8.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中