定量蛋白质组学研究中的荧光差异凝胶电泳技术EttanDIGE-生物通.PDFVIP

定量蛋白质组学研究中的荧光 差异凝胶电泳技术（Ettan DIGE） 要开展蛋白质组学研究，双向电泳是你必须了解掌握的最基础的蛋白质分离技术，正如普通凝 胶电泳对于核酸纯化。可是一提起双向电泳，多数人还是会直皱眉头别摇头摆手又叹气啦，今天 的双向电泳早已深入改进了，特别是其中最热门的荧光差异凝胶电泳技术（DIGE ），因为消除了 传统双向电泳的一些弊端，已经使得好多实验室对双向电泳重拾信心，并逐渐得到越来越多的科学 家的认同。要知道基于双向电泳的蛋白质组分析文献每年都稳步增长，采用DIGE 技术进行研究的 科研论文的比重从2004 年的不到2 ％猛增到2008 年的 19.6%呢。来吧，放下偏见，不要错过，跟 着生物通重新认识这功能强大的DIGE 吧。 前尘往事 方法研究不确定的未知，会“负负得正”吗？不 可能。再加上操作和结果分析的极其复杂，难 一直备受争议的双向电泳何以这么不招 怪一提起双向电泳，人人皱眉。 人待见呢？长话短说。 直到上世纪九十年代，安玛西亚公司 生物样品中蛋白质的复杂多样性远超核 （通用电气生命科学的前身）推出了商品化的 酸，使得单向电泳无法满足蛋白样品分离分析 固相pH 梯度胶条，极大的提高了等电聚焦的 的需求。1975 年O`Farrell 首次介绍了双向电 可重复性，这才使得国际上不同实验室间双向 泳技术，采用等电聚焦和SDS在等电 电泳实验结果比较成为可能。 点和分子量两个方向上对蛋白质进行分离，使 得原本密密麻麻都挤在一条泳道上的蛋白质 不比不知道 得以在另外一个方向上有效分开。这个在当时 比较，是一种习惯，一种本能，也是一种 极具创意的设计虽然被写进了教科书中成为 学问。从学生时代令人翻白眼的“期末考试第 经典技术，可惜在随后的实际应用中却遇到种 几名呀？”，到如今人人热衷的各种的xxx 排 种问题。由于当时第一向电泳的基质是采用两 行榜，以及五花八门的比赛，从不间断地彰显 性电解质配置pH 梯度胶，两性电解质的不稳 人们对比较的热爱。在生命科学研究领域，比 定性导致等电点聚焦结果严重受到实验室条 较更是一种探索求知的最重要的手段肿瘤 件和操作手法等偶然因素的影响，第二向电泳 组织和正常组织有什么不同？从同一细胞中 结果就更不用说了即使不是差之毫厘缪之 分化而来的不同组织有何差异？不比不知道， 千里，这种不确定性也导致了双向电泳结果可 经过各种比较手段找出差异，再研究这些差异 重复性差，稳定性差。不单各实验室之间的结 的前因后果，一直是生命科学领域最常用的研 果难以比较，即使同一实验室的结果也不怎么 究思路。核酸表达差异的研究方法包括差异显 确定。我们都知道，实