推荐一个化学生物学教学试验-Core.PDFVIP

第 23卷 　第 6期 大 学 化 学 2008年 12 月 化学实验 推荐一个化学生物学教学实验 ———电喷雾质谱研究磷酰基对丙氨酸 与溶菌酶分子间相互作用的影响 1 1 1 1, 2 付川 　蔡谊敏 　刘艳 　赵玉芬 ( 1化学生物学福建省重点实验室 　厦门大学化学化工学院　福建厦门 361005 2 厦门大学医学院药学系 　福建厦门 361005) 　　摘要 　介绍一个利用电喷雾质谱研究生物大分子与化学小分子相互作用的实验方法 。讨论 了该实验在化学生物学专业本科生教学工作中的实践效果 。 　　化学生物学的一个重要研究方向是利用多种现代分析手段来研究生物大分子与化学小分 子之间的相互作用 。目前 ,研究生物大分子与化学小分子之间相互作用的技术手段除了各种 ( ) 光谱学技术 如紫外 、荧光 、圆二色等 外 ,主要还有 X 射线晶体衍射 、溶液核磁共振及质谱技 术 。 　　质谱作为一种分析方法 ,长期以来一直用于小分子化合物的结构分析 。随着质谱软电离 ( 技术的不断发展 ,新型生物质谱特别是电喷雾质谱 electro sp ray ion ization m a ss sp ectrom etry, ) ESIM S 已广泛应用于弱相互作用及非共价复合物的检测和研究中。电喷雾离子化的特点是 可以产生多电荷离子而不是碎片离子 ,使质量电荷比降到多数质量分析器都可以检测的范围 内, 因而大大扩展了分子量的分析范围。另外 ,该电离技术能够在接近天然溶液状态的情况 下 ,对生物大分子与各种小分子或其他大分子所形成的非共价复合物进行无损分析 ,能够更加 真实地反映生物大分子的生理状态 。由于 ESIM S具有灵敏度高 、快速和质量精确度高的优 点 ,弱相互作用复合物的化学计量比能够很容易地从分子量推出;通过改变实验条件 ,可以比 较不同化合物与蛋白质亲和力的大小 。 　　相对于生物核磁技术以及 X射线晶体衍射来说 ,质谱技术研究生物大分子与小分子的相 互作用较为简便 、易行 。因此 ,在化学生物学专业的本科教学中引入质谱实验方法 ,对学生深 入了解该专业的前沿研究领域 、研究意义以及研究技术手段 ,具有一定的教学指导意义 。 　　我们在已有的科研基础上 ,将部分研究成果 [ 1 ] 简化成一个简便 、易行的化学生物学本科 教学实验 ———电喷雾质谱研究磷酰基对丙氨酸与溶菌酶分子间相互作用的影响 。该实验在厦 门大学经过 2003级化学生物学专业 39 位学生的教学实验验证 ,约有 96% 的学生顺利完成 , 收到了良好的教学效果 。 43 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 1　实验原理 　　细胞功能通常是由生物分子间的弱相互作用即非共价键相互作用而引起的 ,如酶与底物 、 蛋白质与配体 、蛋白质与蛋白质及抗原抗体反应等 。细胞中的多种反应及过程都是通过一种 简单化学事件来调控的 ,即蛋白的磷酰化及去磷酰化 。N 磷酰化氨基酸是一种具有多种仿生 活性的有机小分子 ,它能自身活化成肽 ,与醇能成酯或者发生磷上酯交换 ,当它与核苷反应时 能生成核苷酸及其衍生物 。 　　电喷雾是一项软电离技术 ,能够在接近天然溶液状态的情况下将弱的蛋白质非共价键复 合物从液相转变为气相进行测定 ,样品分子在电喷雾电离时通常不发生裂解 ,能够更加真实地 反映生物大分子的生理状态 。因此 ,它是一种能快速 、灵敏 、精确地研究溶液中非共价复合物 的方法 。 　　本实验以溶菌酶为模型蛋白,利用电喷雾质谱技术研究化学小分子 N 酰化丙氨酸及丙氨 酸与溶菌酶的弱相互作用 ,观察