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日本囊对虾组织蛋白酶B基因的原核表达及纯化-华中农业大学学报
第 卷 第 期 华 中 农 业 大 学 学 报
３６ １ Vol．３６ No．１
年 月 ,
２０１７ １ JournalofHuazhon A riculturalUniversit Jan．２０１７８６~９２
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日本囊对虾组织蛋白酶 B 基因的原核表达及纯化
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黄 媛 王艺磊 张子平 岳 亮 冯建军 郭松林 林 鹏
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集美大学水产学院 农业部东海海水健康养殖重点实验室 厦门
１． ３６１０２１
,
福建农林大学水产系 福州
２． ３５０００２
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摘要 采用原核表达的方法得到日本囊对虾 组织蛋白酶 基因的重组蛋白 以
Marsuenaeusaonicus B
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, ( ) ,
日本囊对虾卵巢组织为试验材料 采用双标签 和 的方法 用带有 和 酶切位点以及
GST His EcoRⅠ NotⅠ ６×
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HisＧta 的特异引物扩增CathesinB的开放阅读框 并连接至表达质粒 GEXＧ４TＧ２中 将重组表达质粒导入
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大肠杆菌 中 在 条件下 用终浓度为 的 诱导
BL２１ ３０℃ １mmolL IPTGisoro lＧDＧ１Ｇthioalacto ranoside
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５h得到最佳诱导量 His亲和柱进行纯化 纯化蛋白依次于 ８６４２１０molL尿素缓冲液中梯度透析 得到
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复性后可溶于水的重组蛋白 经 SDSＧPAGE检测
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