华支睾吸虫钙调节蛋白的生物学特性及与肝纤维化的关系.pdfVIP

J South Med Univ, 2015, 35(5): 659-664 doi 10.3969/j.issn. 1673-4254.2015.05.07 ·659 · 基础研究 华支睾吸虫钙调节蛋白的生物学特性及与肝纤维化的关系华支睾吸虫钙调节蛋白的生物学特性及与肝纤维化的关系 1，2 3 4 2 郑明慧 ，胡坤华 ，刘 炜 ，余新炳 1 2 中山大学 孙逸仙纪念医院检验科，广东 广州 510120；中山医学院热带病防治重点实验室，病原生物学教研 3 4 室， 药理学教研室，广东 广州 510080 ；第三附属医院广东省肝脏疾病研究重点实验室，广东 广州 510630 摘要：目的对华支睾吸虫成虫（Clonorchissinensis, Cs）钙调节蛋白（CaM）进行生物学及功能分析，以确定其在肝纤维化中的作 用。方法 从Cs cDNA 质粒文库中寻找CsCaM 全长序列，以BLASTx 搜索其同源序列并进行比对分析。以生物信息学进行同 源比对、理化性质分析及功能域预测。以分子生物学方法进行原核克隆，大肠杆菌表达，亲和层析纯化，并将纯化蛋白免疫大 鼠，产生多克隆抗体。ELISA 检测CsCaM 抗体滴度及产生曲线。免疫印迹实验分析CsCaM 重组蛋白纯化及其抗体识别效果。 免疫组化分析其组织定位；腹腔注射法建立CsCaM 致大鼠肝纤维化模型。结果 重组、表达及纯化了CsCaM ，其编码150位 氨基酸，理论相对分子质量23 400。结构域预测其具有EF 手位模序。pET-30a-CsCaM 重组质粒其目的蛋白表达于宿主菌 BL21 E.coli上清，相对分子质量约23 400。总IgG 抗体滴度于2~4 周达较高峰，效价大于1∶51 200。免疫组织化学定位显示 CsCaM 在成虫睾丸表达丰富。CsCaM 腹腔注射大鼠的肝脏均显示不同程度病变，HE 染色可见炎症反应较严重，可见气球样 变、门管区炎及碎片状坏死；网状纤维染色显示小胆管周围胶原增生，有轻到中度纤维化。结论 CsCaM促进大鼠肝脏炎症病变 及纤维化的作用，提示其可能参与了华支睾吸虫病致肝纤维化的作用。 关键词：华支睾吸虫；钙调节蛋白；肝纤维化 Characterization of a Clonorchis sinensis antigen, calmodulin, and its relationship with liver fibrosis 1, 2 3 4 2 ZHENG Minghui , HU Kunhua , LIU Wei , YU Xinbing 1Department of Clinical Laboratory, Sun Yat-sen Memorial Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 510120, China; 2Department of Parasitology, Key Laboratory for Tropical Diseases Control, 3Department of Pharmacology, Zhongshan School of Medicine, Guangzhou 510080, China 4 Guangdong Provincial Key Laboratory of Liver Disease, Third Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510630, China Abstract: Objective To characterize the biological function of calmodulin (CaM) from Clonorchis sinensis (C. sinensis, Cs) and inve